该文旨在探讨乙氧基血根碱(ethoxysanguinarine,Eth)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的人胃癌细胞的影响及其机制.选用SGC7901和DDP耐药的人胃癌细胞系SGC7901/DDP作为细胞模型;Western blot检测多药耐药相关蛋白在SGC7901和SGC7901/DDP细胞的表达水平;MTT实验检测DDP对SGC7901细胞和SGC7901/DDP细胞增殖的抑制作用;用增加浓度的Eth处理SGC7901和SGC7901/DDP细胞后,通过MTT实验检测Eth对SGC7901和SGC7901/DDP细胞增殖的影响;通过台盼蓝拒染实验、克隆形成实验和共聚焦高内涵成像分析系统检测Eth对SGC7901/DDP细胞增殖能力的影响;DAPI染色、Anne-xin V-FITC/PI染色流式细胞术检测Eth对SGC7901/DDP细胞凋亡的影响;GFP-LC3转染实验检测Eth对SGC7901/DDP细胞自噬的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-9、caspase-3和PARP的表达、自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达、多药耐药蛋白P-gp的表达、mTORC1下游关键效应子(mTOR、P70S6K、4E-BP1)的蛋白及磷酸化水平、CIP2A和Akt的蛋白及磷酸化水平;通过RT-qPCR分析Eth处理24 h后,SGC7901/DDP细胞中CIP2A的mRNA水平;在SGC7901/DDP细胞中,瞬时转染pcD-NA3.1-HA-CIP2A,过表达CIP2A,并用Eth处理,通过MTT实验检测对SGC7901/DDP细胞增殖的影响,通过Western blot检测相关蛋白的表达变化;通过分子对接分析Eth与CIP2A的作用位点;进一步通过靶点稳定性药物亲和反应试验检测Eth与CIP2A的结合稳定性;SwissADME预测Eth的药代动力学性质和类药活性.结果表明SGC7901/DDP细胞对Eth的敏感性更高,Eth在低剂量下能够显著抑制SGC7901/DDP细胞的增殖及克隆形成,并改变SGC7901/DDP细胞的形态、圆度、面积.Eth处理组的细胞核明显皱缩,细胞凋亡率显著增加;Eth能下调caspase-9、caspase-3蛋白前体的表达,促进PARP切割,表明Eth诱导SGC7901/DDP细胞发生凋亡;Eth处理组细胞的GFP-LC3呈斑点化聚集;Eth能促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达上调,表明Eth活化SGC7901/DDP细胞自噬;Eth能抑制多药耐药相关蛋白P-gp的表达;Eth下调mTORC1下游关键效应子p-mTOR、p-P70S6K和p-4E-BPl的表达水平,降低CIP2A的表达水平及下游Akt的磷酸化水平并升高PP2A的活性且Eth对SGC7901/DDP细胞中CIP2A的表达水平无显著影响;过表达CIP2A能拮抗Eth处理对SGC7901/DDP细胞增殖的抑制和自噬的活化作用;分子对接模拟发现Eth与CIP2A具有结合作用;靶点稳定性药物亲和反应实验结果显示Eth与CIP2A存在直接结合;SwissADME模拟结果显示Eth具有潜在的类药活性.以上结果表明Eth通过下调CIP2A/PP2A/mTORCl信号通路,抑制SGC7901/DDP细胞增殖,诱导凋亡,活化自噬.该研究为治疗顺铂耐药的胃癌提供新型靶点.

乙氧基血根碱;胃癌;CIP2A;自噬;mTORC1;凋亡

万芳;谭苗;向雨晨;刘雪文;彭鹏;刘莹

湖北医药学院基础医学院,湖北十堰442000;湖北医药学院武当特色中药研究湖北省重点实验室,湖北十堰442000;湖北医药学院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,湖北十堰442000

中国中药杂志

[1]万芳;谭苗;向雨晨;刘雪文;彭鹏;刘莹-.乙氧基血根碱靶向CIP2A抑制SGC7901/DDP细胞增殖及活化自噬的作用机制研究)[J].中国中药杂志,2022(21):5890-5899

乙氧基血根碱,ethoxysanguinarine,BPl,mTORCl

CIP2A,SGC7901,DDP,Eth,cisplatin,胃癌细胞,细胞系,细胞模型,blot,多药耐药相关蛋白,MTT,实验检测,台盼蓝,克隆形成,共聚,高内涵成像分析,系统检测,细胞增殖能力,DAPI,Anne,xin,FITC,流式细胞术,GFP,LC3,转染,细胞自噬,凋亡相关蛋白,caspase,PARP,自噬相关蛋白,耐药蛋白,gp,mTORC1,效应子,P70S6K,4E,BP1,白及,磷酸化,Akt,qPCR,pcD,NA3,HA,过表达,表达变化,性药物,应试,试验检测,SwissADME,药代动力学,动力学性质,细胞的增殖,圆度,细胞核,皱缩,细胞凋亡率,白前,斑点,点化,PP2A,活化作用,分子对接模拟,诱导凋亡,顺铂耐药

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