目的 探究miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞(MSC)成脂分化的影响.方法 ①取1周龄C57BL/6J小鼠胫骨和股骨分离培养MSC.体外培养扩增至P3代,吉姆萨染色,倒置显微镜镜下观察其形态;用流式细胞术检测其细胞表型;经成脂和成骨诱导液分别诱导分化7和14 d,分别用油红O染色和碱性磷酸酶染色检测其体外成脂和成骨分化能力,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其成脂分化关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)以及成骨标志性蛋白骨钙素(OCN)和成骨分化关键转录因子Runx相关转录因子2(Runx2)mRNA表达.②合成与MSC成脂分化相关的微RNA(miRNA)即miR-25-3p模拟物,将miR-25-3p模拟物及其对照miRNA分别瞬时转染P3代MSC,用荧光显微镜观察转染细胞Cy3红色荧光强度鉴定细胞转染效率,RT-qPCR检测转染细胞miR-25-3p表达水平.③将未转染、转染对照miRNA和转染miR-25-3p模拟物的P3代MSC成脂诱导分化7 d,用油红O染色检测细胞脂滴形成数目,RT-qPCR检测其成脂分化关键转录因子CEBPα和PPARγmRNA表达水平.结果 ①倒置显微镜镜下观察发现,分离培养的骨实质来源P3代MSC呈贴壁式螺旋状生长.流式细胞术分析结果显示,P3代MSC高表达CD29,CD90,CD44和Sca-1,低表达或不表达MHC-Ⅱ,CD34,CD45和CD11b.油红O染色和碱性磷酸酶染色结果表明,成脂诱导分化7 d或成骨诱导分化14 d,P3代MSC形成大量脂滴且碱性磷酸酶活性增强,表明P3代MSC体外具有成脂和成骨分化能力;RT-qPCR检测结果表明,与自分化对照组相比,成脂诱导后MSC CEBPα和PPARγmRNA表达水平显著升高(P<0.01),成骨诱导后MSC OCN和Runx2 mRNA表达水平亦显著升高(P<0.01).②荧光显微镜观察结果表明,Cy3荧光标记对照miRNA和miR-25-3p模拟物转染的MSC均可见大量红色荧光;RT-qPCR检测结果表明,与转染对照miRNA的MSC相比,转染miR-25-3p模拟物的MSC内源miR-25-3p表达水平显著升高(P<0.01).③油红O染色结果表明,未转染、转染对照miRNA和转染miR-25-3p模拟物的MSC自分化组只有极少量脂滴,成脂诱导后3组与各自自分化组比较脂滴生成均明显增多(P<0.01),但转染miR-25-3p模拟物诱导组与转染对照miRNA诱导组相比脂滴数量明显减少(P<0.01).RT-qPCR检测结果表明,未转染、转染对照miRNA和转染miR-25-3p模拟物的MSC自分化组均存在少量CEBPα和PPARγmRNA表达,成脂诱导后3组与各自自分化组比较CEBPα和PPARγmRNA表达水平均升高(P<0.01),但转染miR-25-3p模拟物诱导组与转染对照miRNA诱导组相比CEBPα和PPARγmRNA表达水平明显降低(P<0.01).结论 高表达miR-25-3p可抑制小鼠骨实质MSC的成脂分化.

miR-25-3p;间充质干细胞;成脂分化;成脂关键转录因子

袁福临;刘伟江;白海涛;李雪;王洋;刘元林;张毅

军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850

中国药理学与毒理学杂志

[1]袁福临;刘伟江;白海涛;李雪;王洋;刘元林;张毅-.高表达miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的抑制作用)[J].中国药理学与毒理学杂志,2022(05):346-354

成脂关键转录因子

3p,间充质干细胞,成脂分化,MSC,周龄,C57BL,6J,胫骨,股骨,分离培养,体外培养,增至,P3,吉姆,倒置,流式细胞术,细胞表型,用油,成骨分化,分化能力,qPCR,CCAAT,增强子,结合蛋白,CEBP,过氧化物酶体增殖物激活受体,PPAR,白骨,骨钙素,OCN,Runx2,miRNA,荧光显微镜观察,Cy3,红色荧光,荧光强度,细胞转染,转染效率,脂滴,观察发现,贴壁,壁式,螺旋状,CD29,CD90,CD44,Sca,低表达,MHC,CD34,CD45,CD11b,染色结果,成骨诱导分化,碱性磷酸酶活性,自分,荧光标记,极少量,成均,可抑制

0.196269