典型文献
鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价
文献摘要：
目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法,并探究其是否具有抗肺纤维化作用.方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取,再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白(P2),并质谱分析P2蛋白组成.细胞实验分组:C57BL/6小鼠24只,随机分3组(8只/组).对照组、模型组(5 ng/mL TGF-β1处理)、SB431542组(2μmol/L)和鲜广地龙纯化蛋白P2组(13.125μg/mL).动物实验分组:对照组(不处理)、模型组(博来霉素处理)、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2(5 mg/mL).造模后给药21 d,在第22天进行取材.采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制;流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡;HE和Massson染色观察其对肺组织的病理学变化;RT-PCR、Western blot检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen I的调节;机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用,进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用.结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2.体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用(P<0.01),降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达(P<0.001或P<0.01),升高E-cadherin的表达(P<0.01),可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达(P<0.001或P<0.01).体内实验显示,P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域.结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2,且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程.
文献关键词：
鲜广地龙;蛋白纯化;质谱分析;TGF-β/Smad;肌成纤维细胞
中图分类号：
作者姓名：
李舒雨;杨启鑫;左安娜;田林华;霍金海;蒙艳丽;汤庆发;王伟明
作者机构：
南方医科大学中医药学院//广东省中药制剂重点实验室//广东省中药制剂技术工程实验室,广东 广州510515;黑龙江中医药科学院中药所,黑龙江 哈尔滨 150036
文献出处：
引用格式：
[1]李舒雨;杨启鑫;左安娜;田林华;霍金海;蒙艳丽;汤庆发;王伟明-.鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价)[J].南方医科大学学报,2022(04):618-624,封3
A类：
鲜广地龙,地龙蛋白,Massson
B类：
外抗,肺纤维化,活性评价,方便快捷,蛋白纯化,纯化方法,冷冻干燥法,粗提取,色谱分离,分离纯化,P2,质谱分析,蛋白组成,细胞实验,C57BL,TGF,SB431542,动物实验,博来霉素,素处理,取材,CCK8,MRC,细胞毒性,肌成纤维细胞,异常增殖,流式细胞术,HE,肺组织,blot,SMA,Vimentin,cadherin,Collagen,Smad2,分子排阻色谱法,体外实验,低纤维,可抑制,体内实验,炎症细胞,Masson,蓝色,胶原纤维,较为理想
AB值：
0.240107
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