过氧化氢酶(catalase,CAT)是抗氧化酶体系的主要成员,在维持机体氧化还原平衡、抵御病原感染过程中具有重要作用.为研究CAT基因在软体动物应答病原胁迫过程中的作用,实验采用RACE技术通过克隆和序列拼接获得了缢蛏CAT基因的全长cDNA序列,并命名为ScCAT.ScCAT基因全长为2840 bp,编码508个氨基酸.序列分析显示,ScCAT蛋白含有1个CAT核心结构域(25～410),1个保守的酶活性位点(61FNRERIPER-VVHAKGAGA78)和1个亚铁血红素结合位点(351RLFSYPDTH359).多序列比对和系统进化树分析结果显示,ScCAT属于CAT基因家族,且与无脊椎动物文蛤的亲缘关系最近.组织分布显示,ScCAT在所有检测的组织中均能表达,其中在肝胰腺中表达量最高,鳃中次之,血细胞中的表达量最低,分别为闭壳肌的85.67倍、50.09倍和0.76倍.在副溶血弧菌胁迫下,ScCAT在缢蛏肝胰腺中的表达明显上升,且在12 h达到最高值,为对照组的3.56倍;酶活性测定结果显示,副溶血弧菌胁迫显著诱导缢蛏肝胰腺和鳃组织中的CAT活性.为进一步探讨ScCAT的蛋白功能,实验构建ScCAT原核表达质粒,通过诱导、纯化后发现ScCAT重组蛋白具有显著的CAT酶活性.研究表明,ScCAT作为一类重要的抗氧化酶参与了缢蛏体内的免疫应答.

缢蛏;过氧化氢酶;基因克隆;表达分析

乔晓静;张卫卫;邵铱娜;赵雪琳;李成华

宁波大学海洋学院,浙江 宁波 315211;宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,浙江 宁波 315211

水产学报

[1]乔晓静;张卫卫;邵铱娜;赵雪琳;李成华-.缢蛏过氧化氢酶基因的克隆及其功能)[J].水产学报,2022(06):931-941

ScCAT,61FNRERIPER,VVHAKGAGA78,351RLFSYPDTH359

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