目的 构建骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合生物支架材料组织工程骨,探讨低温3D打印联合冷冻干燥法制备的三维仿生复合支架材料内BMSCs增殖、分化、成骨特异性基因表达情况.方法 利用低温3D打印结合真空冷冻干燥法制备三维支架,提取新西兰大白兔的BMSCs,用倒置显微镜及免疫组化鉴定BMSCs的形态及特征.将第3代BMSCs与支架复合培养,分成1 cm支架培养组、2 cm支架培养组和空白组.在不同的培养时间分别进行MTT检测及碱性磷酸酶(ALP)水平测定.采用扫描电子显微镜(SEM)及苏木精-伊红(HE)染色检测细胞以及成骨相关基因的表达量.结果 密度梯度离心法获取培养的原代BMSCs呈梭形或三角形贴壁生长,细胞形态均一呈梭形,8代内仍有很强的增殖能力.ALP染色和脂肪染色均为阴性,糖原染色和α-醋酸萘酚酯酶染色均为阳性,特异性表面标志物CD44、CD54的免疫组织化学染色阳性.本实验制备的三维复合支架具有良好的均一性,冻干后成白色立方体的多孔结构,HE染色及SEM可见细胞在支架孔壁黏附、增殖、生长良好,呈现伸展状态.在实验早期,复合培养组细胞增殖、ALP水平及成骨相关基因表达量均大于空白组(P<0.05);在实验晚期,2 cm支架培养组细胞增殖、ALP水平及成骨相关基因表达水平均高于1 cm支架培养组及空白组(P<0.05).结论 通过细胞形态学、细胞组织化学以及特异性表面标志物CD44、CD54的免疫组织化学染色对分离培养的细胞进行鉴定,说明分离培养的细胞具备BMSCs的特性.本实验室制备的丝素/胶原/羟基磷灰石三维多孔支架具有良好的生物相容性与骨诱导性,有利于细胞黏附、增殖,能促进细胞增殖及成骨相关基因的表达,为构建骨组织工程的良好材料.

骨髓间充质干细胞;仿生骨支架材料;成骨效应

李坡;程威;王家强;姚伟涛;徐云强;李瑞欣;张西正

郑州大学附属肿瘤医院 骨与软组织科,河南 郑州 450008;军事科学院系统工程研究院卫勤保障技术研究所 骨组织工程实验室,天津 300161;河南中医药大学郑州人民医院 骨科,河南 郑州 450053;天津医科大学总医院 骨科,天津 300052;天津市口腔医院 中心实验室,天津 300041

河南医学研究

[1]李坡;程威;王家强;姚伟涛;徐云强;李瑞欣;张西正-.骨髓间充质干细胞复合仿生骨支架成骨效应的研究)[J].河南医学研究,2022(07):1153-1158

仿生骨支架材料

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