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结核分枝杆菌Ag85B DNA疫苗免疫效果的初步评价
文献摘要：
目的 初步评价结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Ag85B DNA疫苗的免疫效果.方法 对含HSV2-gD信号肽基因和Rv1886c基因(共963 bp核苷酸序列)的重组质粒pcD-sRv1886c进行双酶切和测序鉴定.将鉴定正确的重组质粒pcD-sRv1886c转染CHO细胞,Western blot法检测CHO细胞培养液中Ag85B蛋白的表达情况.将重组质粒pcD-sRv1886c经肌肉注射免疫C57BL/6J小鼠,共免疫2次,间隔14 d,首次免疫后14、28及42 d经小鼠眼眶后静脉丛采血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中IgG及IgG1抗体效价;首次免疫后42 d无菌取小鼠脾脏,制成单细胞悬液,流式细胞术检测分泌IFNγ+的CD4+T及CD8+T细胞比例,CCK8法检测脾淋巴细胞增殖情况.结果 双酶切和测序鉴定证明重组质粒pcD-sRv1886c构建正确,转染CHO细胞后表达的蛋白可与鼠抗Ag85B单克隆抗体发生特异性结合.首次免疫后14 d,重组质粒免疫组小鼠血清中IgG及IgG1特异性抗体效价分别为1∶1720和1∶460,28d后为1∶5760和1∶2 560,42d后为1∶6 080和1∶2720.首次免疫后42d,重组质粒免疫组和PBS阴性对照组小鼠脾细胞中CD3+CD4+IFNγ+细胞比例分别为(2.03±0.23)％和(0.14±0.02)％,CD3+CD8+IFNγ+细胞比例分别为(1.05±0.08)％和(0.13±0.01)％,差异均有统计学意义(t分别为18.38和11.58,P均＜0.001).重组质粒免疫组小鼠脾淋巴细胞SI为5.02,明显高于PBS对照组(1.06),且差异有统计学意义(t=15.66,P＜0.001).结论 M.tb Ag85B DNA疫苗可有效诱导机体产生体液免疫及细胞免疫效应.
文献关键词：
结核分枝杆菌;DNA疫苗;Ag85B蛋白
中图分类号：
作者姓名：
王娜;刘琼;杨雨欣;李慧;张炜;马国荣;陈耀庚;万巧凤
作者机构：
宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系,宁夏银川750004;宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川750004;宁夏医科大学理学院数学系,宁夏银川750004
文献出处：
引用格式：
[1]王娜;刘琼;杨雨欣;李慧;张炜;马国荣;陈耀庚;万巧凤-.结核分枝杆菌Ag85B DNA疫苗免疫效果的初步评价)[J].中国生物制品学杂志,2022(12):1427-1431
A类：
Rv1886c,sRv1886c,CD3+CD4+IFN,CD3+CD8+IFN
B类：
结核分枝杆菌,Ag85B,疫苗免疫,免疫效果,初步评价,Mycobacterium,tuberculosis,tb,HSV2,gD,信号肽,肽基,bp,重组质粒,pcD,双酶,转染,CHO,blot,细胞培养,培养液,肌肉注射,C57BL,6J,眼眶,采血,小鼠血清,IgG1,抗体效价,无菌,脾脏,成单,单细胞悬液,流式细胞术,CD4+T,CD8+T,CCK8,淋巴细胞增殖,单克隆抗体,特异性结合,质粒免疫,特异性抗体,28d,42d,PBS,脾细胞,小鼠脾淋巴细胞,SI,体液免疫,细胞免疫,免疫效应
AB值：
0.31176
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