典型文献
Grx2基因敲除小鼠晶状体混浊模型的建立及
Grx2在白内障发病机制中的作用
文献摘要:
目的:建立
Grx2基因敲除(KO)和基因敲入(KI)小鼠模型,探讨
Grx2基因在白内障发病机制中的作用。
方法:选取黑色C57BL/6J鼠各5只,利用CRISPR/Cas9系统分别制作
Grx2 KO小鼠模型和
Grx2 KI小鼠模型,后代小鼠剪尾测序后根据基因型纳入对应分型,观察并比较各基因型小鼠一般情况和晶状体混浊情况。处死各型小鼠,采用苏木精-伊红染色法观察小鼠晶状体病理学改变;采用ELISA法测定小鼠晶状体活性氧簇(ROS)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量;采用Western blot法测定小鼠晶状体中Grx2、谷胱甘肽(GSH)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、二硫化谷胱甘肽(GSSG)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。
结果:剪尾巢式PCR及基因测序证实获得
Grx2 KO和
Grx2 KI纯合子及杂合子小鼠后代。与同龄野生型(WT)小鼠相比,
Grx2 KO纯合子小鼠晶状体混浊提前,而
Grx2 KI纯合子小鼠晶状体一直维持透明。苏木精-伊红染色结果显示,5月龄
Grx2 KO小鼠晶状体纤维出现大量缝隙和空泡。5月龄
Grx2 KO小鼠晶状体8-OHdG含量为(3.886±0.326)ng/ml,高于WT小鼠的(3.531±0.250)ng/ml,差异有统计学意义(
t=2.711,
P=0.033);
Grx2 KO小鼠晶状体ROS荧光强度为1 594±132,高于WT小鼠的1 157±123,差异有统计学意义(
t=3.384,
P=0.028)。Western blot结果显示,5月龄
Grx2 KO小鼠晶状体Grx2、GSH和Bcl-2相对表达量分别为0.23±0.01、0.70±0.06和0.32±0.03,较WT小鼠的0.52±0.02、1.04±0.08和0.49±0.04降低,差异均有统计学意义(
t=2.815,
P=0.020;
t=2.457,
P=0.033;
t=2.279,
P=0.041)。
结论:本实验成功制作
Grx2 KO和
Grx2 KI小鼠模型,
Grx2 KO小鼠年龄相关性白内障的发生和发展加速。
文献关键词:
白内障;氧化损伤;谷氧还蛋白;基因敲除技术;基因敲入技术;小鼠;晶状体上皮细胞
中图分类号:
作者姓名:
郭勇;郭辰峻;张婕;宁小娜;陈曦;严宏
作者机构:
西安市人民医院(西安市第四医院) 陕西省眼科医院,西安 710004;空军军医大学唐都医院眼科,西安 710038;重庆医科大学附属第二医院眼科,重庆 400010
文献出处:
引用格式:
[1]郭勇;郭辰峻;张婕;宁小娜;陈曦;严宏-.Grx2基因敲除小鼠晶状体混浊模型的建立及
Grx2在白内障发病机制中的作用
)[J].中华实验眼科杂志,2022(10):894-901
A类:
Grx2,基因敲入技术
B类:
基因敲除小鼠,晶状体混浊,KO,KI,小鼠模型,C57BL,6J,CRISPR,Cas9,后代,基因型,处死,各型,苏木,木精,伊红,染色法,活性氧簇,ROS,脱氧鸟苷,OHdG,blot,谷胱甘肽,GSH,Bcl,GSSG,Bax,白相,相对表达量,基因测序,纯合子,杂合子,同龄,野生型,WT,染色结果,月龄,缝隙,空泡,ml,荧光强度,鼠年,年龄相关性白内障,氧化损伤,谷氧还蛋白,基因敲除技术,晶状体上皮细胞
AB值:
0.198836
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