目的:建立 Grx2基因敲除(KO)和基因敲入(KI)小鼠模型，探讨 Grx2基因在白内障发病机制中的作用。 方法:选取黑色C57BL/6J鼠各5只，利用CRISPR/Cas9系统分别制作 Grx2 KO小鼠模型和 Grx2 KI小鼠模型，后代小鼠剪尾测序后根据基因型纳入对应分型，观察并比较各基因型小鼠一般情况和晶状体混浊情况。处死各型小鼠，采用苏木精－伊红染色法观察小鼠晶状体病理学改变；采用ELISA法测定小鼠晶状体活性氧簇(ROS)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量；采用Western blot法测定小鼠晶状体中Grx2、谷胱甘肽(GSH)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、二硫化谷胱甘肽(GSSG)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量。 结果:剪尾巢式PCR及基因测序证实获得 Grx2 KO和 Grx2 KI纯合子及杂合子小鼠后代。与同龄野生型(WT)小鼠相比， Grx2 KO纯合子小鼠晶状体混浊提前，而 Grx2 KI纯合子小鼠晶状体一直维持透明。苏木精－伊红染色结果显示，5月龄 Grx2 KO小鼠晶状体纤维出现大量缝隙和空泡。5月龄 Grx2 KO小鼠晶状体8-OHdG含量为(3.886±0.326)ng/ml，高于WT小鼠的(3.531±0.250)ng/ml，差异有统计学意义( t＝2.711， P＝0.033)； Grx2 KO小鼠晶状体ROS荧光强度为1 594±132，高于WT小鼠的1 157±123，差异有统计学意义( t＝3.384， P＝0.028)。Western blot结果显示，5月龄 Grx2 KO小鼠晶状体Grx2、GSH和Bcl-2相对表达量分别为0.23±0.01、0.70±0.06和0.32±0.03，较WT小鼠的0.52±0.02、1.04±0.08和0.49±0.04降低，差异均有统计学意义( t＝2.815， P＝0.020； t＝2.457， P＝0.033； t＝2.279， P＝0.041)。 结论:本实验成功制作 Grx2 KO和 Grx2 KI小鼠模型， Grx2 KO小鼠年龄相关性白内障的发生和发展加速。

白内障;氧化损伤;谷氧还蛋白;基因敲除技术;基因敲入技术;小鼠;晶状体上皮细胞

郭勇;郭辰峻;张婕;宁小娜;陈曦;严宏

西安市人民医院（西安市第四医院）　陕西省眼科医院，西安　710004;空军军医大学唐都医院眼科，西安　710038;重庆医科大学附属第二医院眼科，重庆　400010

中华实验眼科杂志

[1]郭勇;郭辰峻;张婕;宁小娜;陈曦;严宏-.Grx2基因敲除小鼠晶状体混浊模型的建立及 Grx2在白内障发病机制中的作用 )[J].中华实验眼科杂志,2022(10):894-901

Grx2,基因敲入技术

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