目的:探讨Anti-白细胞介素(IL)-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的抑制作用及其机制。方法:选取SPF级健康无眼疾6~8周龄雌性C57BL/6N小鼠66只，其中24只采用光感受器维生素A类结合蛋白(IRBP)651-670诱导小鼠EAU模型，分别在免疫前及免疫后第3、12、18天各取6只小鼠，流式细胞术检测各时间点小鼠脾脏、淋巴结和眼球中IL-17A + γ干扰素(IFN-γ) + CD4 + T细胞比例。取6只小鼠制作EAU模型，免疫后18 d采用小动物成像仪进行眼底拍照并行光相干断层扫描(OCT)检查。检查完成后处死小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法检测小鼠视网膜炎症反应和组织结构形态学改变；取淋巴结行流式细胞术检测IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例，按照表达数量不同分为IL-17A + IFN-γ +细胞高表达组和IL-17A + IFN-γ +细胞低表达组，比较2个组小鼠视网膜损伤情况。取36只小鼠制作EAU模型，采用随机数字表法分成Anti-IL-12/IL-23 p40组和IgG组，每组18只，分别尾静脉注射Anti-IL-12/IL-23 p40和IgG，每3天1次。免疫后第12天和第18天每组各取6只小鼠，分别取淋巴结和眼球组织，采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例。免疫后第24天，每组各取6只小鼠，摘取眼球，采用苏木精－伊红染色法观察视网膜损害情况；采用流式细胞仪检测CD4 + T细胞体外诱导分化情况；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞诱导分化后IL-17和IFN-γ表达情况；采用实时荧光定量PCR法检测IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞诱导分化后Th1细胞转录因子T-bet和Th17细胞转录因子维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)相对表达量。 结果:免疫前和免疫后第3、12、18天，淋巴结、脾脏、眼球中IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例总体比较差异均有统计学意义( H＝9.642、16.531、10.385，均 P<0.05)，其中与免疫前相比，EAU小鼠免疫后第12天淋巴结IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例明显升高；免疫后第18天脾脏、眼球中IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。IL-17A + IFN-γ +细胞高表达组小鼠视网膜严重水肿、视网膜脱离、重度炎性细胞浸润和广泛视网膜褶皱；IL-17A + IFN-γ +细胞低表达组小鼠视网膜轻度水肿、局灶性炎性细胞浸润、轻度视网膜褶皱。Anti-IL-12/IL-23 p40组免疫后18 d，眼球中CD3和IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例低于IgG组，差异均有统计学意义( t＝15.304、8.080，均 P<0.05)；免疫后12 d，Anti-IL-12/IL-23 p40组淋巴结中IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞比例为(0.33±0.18)%，明显低于IgG组的(4.83±0.45)%，差异有统计学意义( t＝15.974， P<0.001)。与IgG组相比，Anti-IL-12/IL-23 p40组Th1、Th17、IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞百分比及IL-17、IFN-γ、T-bet、ROR-γt表达量明显降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:Anti-IL-12/IL-23 p40可通过抑制IL-17A + IFN-γ + CD4 + T细胞发挥对EAU的治疗作用。

葡萄膜炎;药物治疗;白细胞介素12亚基p40;单克隆抗体;光感受器间维生素A类结合蛋白;小鼠

崔雪雪;张智慧;吴凌子;栗勇涛;陈爽;陈努;张晓敏

天津医科大学眼科医院　天津医科大学眼视光学院　天津医科大学眼科研究所　国家眼耳鼻喉疾病临床医学研究中心天津市分中心　天津市视网膜功能与疾病重点实验室，天津　300384

中华实验眼科杂志

[1]崔雪雪;张智慧;吴凌子;栗勇涛;陈爽;陈努;张晓敏-.Anti-IL-12/IL-23 p40抗体对实验性自身免疫性葡萄膜炎的抑制作用及其机制)[J].中华实验眼科杂志,2022(08):707-715

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