典型文献
应用于基因编辑的核糖核蛋白复合体的构建与活性验证
文献摘要：
CRISPR/Cas9基因编辑技术具有操作简单、成本低廉和编辑效率高等优点,已经被广泛应用于动物、植物、微生物的基因编辑研究.在该技术体系中,发挥核酸剪切功能的是Cas9蛋白和guideRNA(gRNA)组装而成的核糖核蛋白复合体,即RNP(ribonucleoprotein)复合体.目前,应用体外组装的RNP复合体直接递送进入受体细胞进行基因编辑的研究越来越多,成为提高编辑效率、降低脱靶率的有效手段.本研究以获得具有高效剪切活性的RNP复合体为试验目的,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了Cas9蛋白,并通过His-tag亲和树脂对重组Cas9蛋白进行了纯化;同时,通过T7转录试剂盒对gRNA进行体外转录和纯化,使纯化的Cas9蛋白和gRNA自发组装成RNP复合体,经体外活性检测,RNP复合体具有很好的DNA双链剪切活性;将其与donor DNA共同转化到黑曲霉菌株,成功敲除了目标蛋白,编辑效率达到90％以上.本研究获得的RNP复合体,可以应用于丝状真菌的基因编辑,节约了试验时间与成本,并推动RNP介导的基因编辑技术在更多领域的应用.
文献关键词：
Cas9蛋白;RNP复合体;大肠杆菌;活性验证
中图分类号：
作者姓名：
高伟欣;黄火清;赵晶;张鑫;杨宁;杨浩萌
作者机构：
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193
文献出处：
引用格式：
[1]高伟欣;黄火清;赵晶;张鑫;杨宁;杨浩萌-.应用于基因编辑的核糖核蛋白复合体的构建与活性验证)[J].生物技术通报,2022(08):60-68
A类：
guideRNA
B类：
核糖,核蛋白,复合体,活性验证,CRISPR,Cas9,基因编辑技术,编辑效率,编辑研究,gRNA,RNP,ribonucleoprotein,递送,送进,体细胞,脱靶,大肠杆菌,BL21,DE3,His,tag,T7,试剂盒,体外转录,装成,体外活性,活性检测,双链,donor,黑曲霉菌,敲除,丝状真菌
AB值：
0.301335
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