[背景]目前犬布鲁氏菌病诊断存在一定的困难.[目的]筛选并研究犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株的特异性抗原表位.[方法]利用噬菌体肽库展示技术,以犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株作为靶分子,包被酶标板,用12肽随机肽库经过3轮生物淘洗程序进行筛选.经过3轮筛选后,噬菌体产出率从5.00×10-7增加到9.84×10-6,假阳性率逐轮降低.从第3轮筛选的阳性克隆中随机挑取14个进行增殖,提取基因组DNA,进行测序分析;并通过iELISA和cELISA检测阳性克隆的亲和性和特异性.[结果]14株阳性单克隆噬菌体共出现3种不同的短肽序列,分别是KMSIRHPIRLPI、ILRRRRKRIIQI和QRIHMRLTTQS;iELISA结果表明3种短肽序列与单克隆抗体的亲和性依次为 KMSIRHPIRLPI＞ILRRRRKRIIQI＞QRIHMRLTTQS;cELISA 结果显示短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI特异性较强.对亲和性较强、特异性较高的2条短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI展开具体分析,比对分析表明KMSIRHPIRLPI与犬种布鲁氏菌RM6/66菌株的肽酶C26家族蛋白(PuuD)有比较高的相似性,氨基酸符合率为75％,而且存在4位连续相似氨基酸;ILRRRRKRIIQI与布鲁氏菌6/66菌株中3-氧酰基-[酰基载体蛋白]还原酶(OAR)相似性较高,氨基酸符合率为75％,存在2位连续相似氨基酸.[结论]利用噬菌体肽库展示技术筛选出与犬种布鲁氏菌ZG分离株单克隆抗体特异性结合的短肽序列.

犬种布鲁氏菌;单克隆抗体;12肽库;抗原表位

李巧玲;蒋卉;朱良全;冯宇;彭小薇;范学政;秦玉明;丁家波

中国兽医药品监察所国家/OIE布鲁氏菌病参考实验室,北京102600

微生物学通报

[1]李巧玲;蒋卉;朱良全;冯宇;彭小薇;范学政;秦玉明;丁家波-.犬种布鲁氏菌ZG株单克隆抗体4H3抗原模拟表位的筛选及分析)[J].微生物学通报,2022(08):3244-3252

犬种布鲁氏菌,4H3,KMSIRHPIRLPI,ILRRRRKRIIQI,QRIHMRLTTQS,RM6,PuuD

ZG,单克隆抗体,布鲁氏菌病,抗原表位,噬菌体,包被,淘洗,产出率,假阳性率,隆中,测序分析,iELISA,cELISA,亲和性,共出,短肽,肽序列,开具,比对分析,肽酶,C26,符合率,连续相,酰基,载体蛋白,还原酶,OAR,技术筛选,分离株,抗体特异性,特异性结合

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