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非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立
文献摘要：
为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)核酸的荧光PCR方法,试验根据GenBank中ASFV的p72基因和PCV2的ORF1基因序列,分别设计特异性引物,通过对加样体系和扩增程序的优化,建立了检测ASFV和PCV2的双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价,最后对收集的临床样品进行检测.结果表明,最终确立的20 μL反应体系中各引物最佳添加量为:F1 0.7 μL、R1 1.0 μL、F20.8 μL和R2 1.5 μL;优化后的扩增反应程序为:95℃预变性3 min;94℃变性5 s,54℃退火20 s(此处收集荧光),40个循环.该方法具有很好的特异性,不与其他常见猪病原体发生交叉反应.检测ASFV和PCV2的灵敏度分别可达5.6 copies/μL和3.2 copies/μL,Tm值的批内和批间变异系数均不高于1.0％,对14份临床样品的检测结果与参比方法一致.本研究所建立ASFV和PCV的双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR方法敏感性高,特异性好,可用于临床2种疾病的快速检测.
文献关键词：
非洲猪瘟病毒;猪圆环病毒;SYBR Green Ⅰ;荧光PCR
中图分类号：
作者姓名：
于新友;李天芝;王金良;姚春阳;沈志强
作者机构：
山东绿都生物科技有限公司,山东 滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东 滨州256600
文献出处：
引用格式：
[1]于新友;李天芝;王金良;姚春阳;沈志强-.非洲猪瘟病毒和猪圆环病毒2型双重SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测方法的建立)[J].中国兽医学报,2022(05):862-866
A类：
B类：
非洲猪瘟病毒,猪圆环病毒,SYBR,Green,同时检测,ASFV,PCV2,GenBank,p72,ORF1,基因序列,特异性引物,增程,反应体系,最佳添加量,R1,F20,退火,此处,常见猪病,病原体,交叉反应,copies,Tm,参比方法,快速检测
AB值：
0.274464
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