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蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立
文献摘要：
利用PCR技术扩增蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)E蛋白第三结构域(Domain Ⅲ,D Ⅲ)基因并将其插入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-TBEV-E-D Ⅲ.将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化目的蛋白.将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立TBEV抗体间接ELISA检测方法.结果 显示,重组蛋白TBEV E-D Ⅲ在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,蛋白表达的最佳条件为30℃、0.6 mmol/L IPTG诱导6 h;TBEV抗体间接ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,该方法可特异性检测TBEV阳性血清,与寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)阳性血清无交叉反应,批内和批间变异系数(CV)均小于10％.结果表明,成功表达并纯化了 TBEV E-D Ⅲ重组蛋白,以其为包被抗原建立的TBEV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.
文献关键词：
蜱传脑炎病毒;E蛋白;DomainⅢ;原核表达;间接ELISA
中图分类号：
作者姓名：
张梦瑶;焦翠翠;黄培;金宏丽;白玉洁;龚志远;宋雨濛;李媛媛;张海丽;王化磊
作者机构：
吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室,吉林长春130062
文献出处：
引用格式：
[1]张梦瑶;焦翠翠;黄培;金宏丽;白玉洁;龚志远;宋雨濛;李媛媛;张海丽;王化磊-.蜱传脑炎病毒E蛋白D Ⅲ的表达与抗体间接ELISA检测方法的建立)[J].中国兽医学报,2022(04):710-717
A类：
亲和层析介质
B类：
蜱传脑炎病毒,tick,borne,encephalitis,virus,TBEV,结构域,Domain,入原,原核表达载体,pET,30a,重组质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,感受态,IPTG,目的蛋白,镍离子,子金,金属螯合,NTA,重组蛋白,包被抗原,包涵体,最佳条件,特异性检测,阳性血清,寨卡病毒,Zika,ZIKV,乙型脑炎病毒,Japanese,JEV,西尼罗病毒,West,Nile,WNV,交叉反应,CV
AB值：
0.338159
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