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肠道病毒A组71型VP1蛋白突变株的拯救及其对病毒毒力的影响
文献摘要：
目的:拯救肠道病毒A组71型(enterovirus group A type 71, EV-A71)VP1蛋白突变型毒株(Val147→Ala)，探究该位点对病毒毒力的影响。方法:以SDLY107构建的质粒pMD19-T-EGFP-107为模板，利用定点突变和反向遗传学技术构建重组质粒pMD19-T-EGFP-107(VP1-1)，重组质粒转染至BSR-T7/5细胞，转染产物在RD细胞中连续传代3次，成功拯救突变型毒株SDLY-EGFP-107(VP1-1)，qRT-PCR检测病毒复制力，细胞增殖(CCK-8)和乳酸脱氢酶(LDH)实验检测病毒致细胞损伤力。结果:重叠融合PCR扩增得到目的片段，大小约3.4 kb；重组质粒经双酶切鉴定，测序验证突变成功。重组质粒转染BSR-T7/5细胞24 h观察到明显荧光，所收培养物上清接种至RD细胞24 h观察到明显荧光。qRT-PCR检测到突变型毒株SDLY-EGFP-107(VP1-1)在RD细胞中的复制能力弱于强毒株SDLY107(
t＝9.58，
P<0.001)。CCK-8、LDH实验检测到突变型毒株SDLY-EGFP-107(VP1-1)在RD细胞(
t＝106.60，
P<0.001；
t＝39.88，
P<0.001)、SH-SY5Y细胞(
t＝18.72，
P<0.001；
t＝19.09，
P<0.001)中的致细胞损伤力均明显弱于强毒株SDLY107。
结论:成功拯救突变型毒株SDLY-EGFP-107(VP1-1)，证实VP1蛋白第147位氨基酸位点突变可降低病毒的复制力及其致细胞损伤力，为进一步研究VP1蛋白在EV-A71致病机制中的作用提供基础。
文献关键词：
肠道病毒;VP1蛋白;突变株;毒力
中图分类号：
作者姓名：
杜蒙育;徐小莹;陈梦婷;王泽群;温红玲
作者机构：
山东大学齐鲁医学院公共卫生学院微生物检验学系 山东省"十三五"高等学校感染性疾病防控重点实验室，济南 250012
文献出处：
引用格式：
[1]杜蒙育;徐小莹;陈梦婷;王泽群;温红玲-.肠道病毒A组71型VP1蛋白突变株的拯救及其对病毒毒力的影响)[J].中华实验和临床病毒学杂志,2022(06):701-706
A类：
Val147,SDLY107,SDLY
B类：
肠道病毒,VP1,突变株,拯救,毒力,enterovirus,group,type,EV,A71,突变型,毒株,Ala,该位,pMD19,EGFP,定点突变,反向遗传学,遗传学技术,技术构建,重组质粒,质粒转染,BSR,T7,RD,连续传代,qRT,病毒复制,CCK,乳酸脱氢酶,LDH,实验检测,细胞损伤,伤力,kb,粒经,双酶,上清,复制能力,SH,SY5Y,氨基酸位点,位点突变,致病机制
AB值：
0.286785
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