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表达弓形虫TgGRA4重组腺病毒载体的构建及鉴定
文献摘要：
本研究通过构建表达弓形虫致密颗粒抗原4(TgGRA4)蛋白的重组腺病毒vAd5-TgGAR4,并在HEK293细胞内包装病毒后进行蛋白表达,为弓形虫病疫苗研发提供研究基础.采用PCR方法扩增弓形虫TgGRA4基因,将其连接到pCR259穿梭载体上,构建重组穿梭载体pCR259-TgGRA4;之后转化到含有腺病毒载体Transpose-AdTM 294的HighQ-1 Transpose-AdTM 294感受态细胞中,通过同源重组获得重组腺病毒载体294-TgGRA4;载体质粒经Pac Ⅰ酶切线性化后转染至HEK293细胞,包装重组腺病毒vAd5-TgGRA4,TCID50方法测定病毒滴度.经PCR鉴定和测序,获得TgGRA4基因,与参考序列(M76432)同源性为100％,经EcoR Ⅰ、Xba Ⅰ双酶切鉴定、蛋白质印迹和IFA检测,表明重组穿梭载体pCR259-TgGRA4构建成功,并能表达TgGRA4蛋白,经NdeⅠ酶切鉴定,表明重组腺病毒载体294-TgGRA4构建成功,IFA检测包装的重组腺病毒vAd5-TgGRA4能表达TgGRA4蛋白,初代重组腺病毒滴度为2.85×108 IU/mL.当感染复数(MOI)=10,病毒滴度可以提高到4.34×108 IU/mL.本研究构建了含有弓形虫TgGRA4基因的重组腺病毒载体294-TgGRA4,制备了高滴度的vAd5-TgGRA4并能表达目的蛋白.
文献关键词：
弓形虫;TgGRA4;重组腺病毒;构建;鉴定
中图分类号：
作者姓名：
李莉;周博宇;李威;金春梅;于龙政;张厚双
作者机构：
延边大学农学院,延吉133002;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241
文献出处：
引用格式：
[1]李莉;周博宇;李威;金春梅;于龙政;张厚双-.表达弓形虫TgGRA4重组腺病毒载体的构建及鉴定)[J].中国动物传染病学报,2022(03):1-6
A类：
TgGRA4,vAd5,TgGAR4,pCR259,Transpose,AdTM,HighQ,M76432
B类：
重组腺病毒载体,建表,HEK293,内包装,装病,弓形虫病,病疫苗,疫苗研发,接到,穿梭,感受态,同源重组,质粒,粒经,Pac,切线,线性化,转染,TCID50,病毒滴度,参考序列,同源性,EcoR,Xba,双酶,蛋白质印迹,IFA,Nde,IU,复数,MOI,研究构建,目的蛋白
AB值：
0.196155
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