目的 观察db/db糖尿病小鼠心肌细胞及高糖环境诱导下的H9c2心肌细胞中EMRE分子表达水平的变化,探究EMRE分子的表达变化对糖尿病心肌病心肌细胞凋亡的影响.方法(1)选取db/db糖尿病小鼠和野生型(WT)小鼠各6只,分别饲养18周,利用蛋白质印迹法、免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测小鼠心肌细胞中EMRE的表达水平;小动物超声仪检测小鼠的心脏功能.(2)将购买来的H9c2心肌细胞随机分为四组,即正常组(NG,培养基中含5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,培养基中含33 mmol/L葡萄糖)、高糖+阴性对照组(HG+NC siRNA,培养基中含33 mmol/L葡萄糖+阴性对照siRNA)、高糖+转染EMRE组(HG+EMRE siRNA,培养基中含33 mmol/L葡萄糖+转染EMRE siRNA),培养24 h,采用蛋白质印迹法检测四组实验细胞中EMRE、凋亡蛋白caspase-3、Bax、caspase-9、细胞色素c(Cyto-c)以及凋亡拮抗蛋白MCL-1表达情况;利用流式细胞术检测细胞凋亡水平;ATP检测试剂盒检测各组细胞线粒体中ATP含量;α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒检测其活性;活性氧(ROS)检测试剂盒检测各组细胞内ROS水平.结果(1)与WT小鼠相比,db/db糖尿病小鼠心肌中EMRE分子表达水平明显升高,左室射血分数、左心室短轴缩短率降低(P<0.01).(2)与正常组相比,高糖组H9c2心肌细胞EMRE表达升高,蛋白质印迹法检测出caspase-3(P<0.01)、Bax(P<0.01)、caspase-9(P<0.001)和Cyto-c(P<0.001)凋亡蛋白的表达增加,凋亡拮抗蛋白MCL-1的表达下降(P<0.01),心肌细胞凋亡明显增加,线粒体ATP浓度异常减少(P<0.01),同时 α-KGDH活性下降(P<0.01),而线粒体ROS生成增加(P<0.01);当下调EMRE表达后,心肌细胞凋亡水平受到明显抑制,心肌细胞线粒体ATP浓度升高(P<0.01),α-KGDH活性升高(P<0.01),ROS水平明显降低(P<0.01).结论 糖尿病小鼠心肌细胞中EMRE表达水平升高,小鼠心脏收缩功能降低.高糖环境可诱导H9c2心肌细胞EMRE的表达升高,促进心肌细胞凋亡.下调EMRE表达后,心肌细胞的凋亡水平受到抑制.

EMRE;细胞凋亡;心肌细胞;糖尿病心肌病

曹兴丹;陈子仪;宋小刚;张玉秀;陈敏;汤吉超;李萍萍;荆哲;陈永清

甘肃中医药大学第一临床医学院,甘肃 兰州730000;中国人民解放军联勤保障部队第九四医院基础医学实验室 甘肃省干细胞与基因药物重点实验室,甘肃 兰州730050;中国人民解放军联勤保障部队第九四医院心血管内科,甘肃 兰州730050;甘肃省中心医院心血管内科,甘肃 兰州730070

心血管病学进展

[1]曹兴丹;陈子仪;宋小刚;张玉秀;陈敏;汤吉超;李萍萍;荆哲;陈永清-.EMRE在高糖环境中的变化对心肌细胞凋亡机制的研究)[J].心血管病学进展,2022(10):953-960

EMRE,HG+EMRE

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