目的 探讨芪术颗粒含药血清对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)失窗孔化及整合素αVβ3(integrinαVβ3,ITGαVβ3)-黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)-大鼠肉瘤(rat sarcoma,Ras)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号通路的影响与机制.方法 70只雄性Wistar大鼠,先取50只大鼠分为正常对照组、模型组及芪术颗粒高、中、低剂量组,每组10只,分别给予相应处理,制备含药血清和正常对照组血清.另20只雄性Wistar大鼠用于制备肝窦内皮细胞,其中14只大鼠采用CCl4腹腔注射建立肝纤维化模型4周后,采用Masson与HE染色观察肝纤维化程度.另6只大鼠作为正常对照.分离LSECs,将LSECs分为阳性对照组、模型组、芪术低剂量组、芪术中剂量组、芪术高剂量组,其中模型组加入正常大鼠血清,其余组分别加入相应含药血清,常规培养48小时,进行相关指标检测.流式细胞仪检测大鼠肝窦内皮细胞中的血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)阳性细胞比例和肝窦内皮细胞1抗体(hepatic sinusoidal endothelial cells antibody,SE-1)阳性细胞比例;扫描电镜观察肝窦内皮细胞窗口情况;Western Blot法检测LSECs中CD31、SE-1、Ras、ITGαVβ3、FAK、MAPK、磷酸化黏着斑激酶(phosphorylation focal adhesion kinase,p-FAK)及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylation mitogen-activated protein kinases,p-MAPK)蛋白表达情况.结果(1)大鼠CCl4腹腔注射造模后纤维增生显著,肝纤维化LSECs组的CD31阳性细胞比例和SE-1阳性细胞比例均显著升高.(2)模型组窗孔数少而稀疏,芪术颗粒干预后,扫描电镜观察LSECs窗孔数有所恢复,尤以芪术高剂量组明显.(3)与模型组比较,芪术各剂量组的SE-1、CD31、αVβ3表达量明显降低(P<0.05),其中芪术各剂量组的SE-1、CD31、αVβ3表达量随剂量的升高而降低,表现为一定的剂量依赖关系.与正常对照组相比,模型组LSECs中整合素αVβ3、p-FAK和p-MAPK蛋白的表达增加(P<0.05).(4)经芪术颗粒含药血清治疗后,CCl4诱导的肝纤维化大鼠LSECs整合素 αVβ3、FAK、MAPK、p-FAK和p-MAPK蛋白表达降低(P<0.05).结论 芪术颗粒含药血清可通过减轻CCl4诱导的肝纤维化大鼠LSECc失窗孔化、改变LSECs表型,减少毛细血管的增值,从而发挥抗肝纤维化的作用,其机制可能与调控整合素αVβ3-FAK-Ras/MAPK信号通路有关.

肝纤维化;肝窦内皮细胞;芪术颗粒;窗孔;动物实验;细胞实验;信号通路;大鼠

姜心航;张荣;刘绍能;马继征;丁佳媛;刘慧敏;张玲;路迎冬

100053 北京,中国中医科学院广安门医院消化内科;新疆维吾尔自治区人民医院中医科;100053 北京,中国中医科学院病理科

环球中医药

[1]姜心航;张荣;刘绍能;马继征;丁佳媛;刘慧敏;张玲;路迎冬-.芪术颗粒对肝窦内皮细胞的影响及机制研究)[J].环球中医药,2022(08):1343-1349

芪术颗粒,LSECc

肝窦内皮细胞,含药血清,四氯化碳,CCl4,肝纤维化模型,模型大鼠,liver,sinusoidal,endothelial,cells,LSECs,窗孔,整合素,integrin,ITG,focal,adhesion,FAK,鼠肉,肉瘤,rat,sarcoma,Ras,丝裂原活化蛋白激酶,mitogen,activated,protein,kinases,MAPK,Wistar,正常对照,腹腔注射,Masson,HE,肝纤维化程度,阳性对照,高剂量,大鼠血清,别加,规培,指标检测,流式细胞仪,细胞黏附分子,platelet,molecule,CD31,阳性细胞,hepatic,antibody,电镜观察,Blot,磷酸化黏着斑激酶,phosphorylation,孔数,尤以,剂量依赖,依赖关系,少毛,毛细血管,抗肝纤维化,动物实验,细胞实验

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