目的 构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-InTMCHO细胞系,并进行药物相互作用筛选.方法 利用Lipofectamine?2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-InTM CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性.结果 与Flp-InTMCHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-InTM CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-InTM CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强.结论 成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-InTM CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强.

细胞色素P450家族2亚家族E成员1;稳定表达;Flp-InTMCHO细胞;蛋白免疫印迹法;实时荧光定量PCR;转染

赵永龙;郭玮钰;龙昌兰;陆定艳;陈帅帅;李勇军;刘亭

贵州医科大学 药学院,贵州 贵阳 550004;贵州医科大学 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心,贵州 贵阳 550004;贵州医科大学 贵州省药物制剂重点实验室 &省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州 贵阳 550004

贵州医科大学学报

[1]赵永龙;郭玮钰;龙昌兰;陆定艳;陈帅帅;李勇军;刘亭-.细胞色素P4502E1稳定转染Flp-InTM CHO细胞模型的建立)[J].贵州医科大学学报,2022(12):1390-1395

InTM,InTMCHO,pcDNA5

细胞色素,P4502E1,稳定转染,Flp,细胞模型,稳定表达,亚家族,CYP2E1,细胞系,药物相互作用,Lipofectamine,FRT,重组质粒,潮霉素,聚合酶链式反应,目的基因,qRT,蛋白免疫印迹法,blot,对乙酰氨基酚,APAP,性敏感,粒组,bp,条带,蛋白表达水平

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