目的:通过实时荧光PCR-高分辨熔解曲线(HRM)联合分析技术,建立小活络丸(大蜜丸)中小麦粉掺伪快速、准确鉴别方法.方法:通过优化前处理方法,提取小活络丸样品的基因组;通过文献检索和生物信息学分析,得到小麦粉特异性引物;使用实时荧光PCR-HRM技术,对10批次小麦(粉)、16种其他禾本科植物及7种常见高淀粉食物样品进行特异性扩增,采用克隆测序对结果进行再确认;考察实时荧光PCR-HRM方法的检出限、精密度和重复性,同时对市售的小活络丸样品进行检测.结果:试验筛选获得了适用于本研究的特异性引物,建立了实时荧光PCR-HRM小活络丸掺伪小麦的检测方法;小活络丸样品掺伪小麦粉的检出限为0.01 g· g-1,试验精密度Ct值为26.63(RSD=2.15％),Tm值为89.53℃(RSD=0.05％);重复性Ct值为26.65(RSD=3.20％),Tm值为89.53℃(RSD=0.12％).试验对市售的4个厂家9批次共计81份样品进行分析,确定了3批次来源于A厂家的小活络丸样品存在小麦粉掺伪的问题,将PCR扩增产物克隆测序,其结果为小麦(Triticum Aestivum L.).结论:本研究建立了实时荧光PCR-HRM检测方法,可以快速判定小活络丸中小麦粉掺伪样品.

小活络丸;小麦粉;实时荧光PCR;高分辨率熔解曲线;禾本科植物

任秀;王菲菲;李静;白继超;张聿梅;马双成;崔生辉

中国食品药品检定研究院,北京100050

中国药事

[1]任秀;王菲菲;李静;白继超;张聿梅;马双成;崔生辉-.小活络丸中小麦粉掺伪实时荧光PCR检测方法的建立)[J].中国药事,2022(01):66-77

Aestivum

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