目的 建立并评估基于微流控芯片(MC)技术检测布鲁氏菌(简称布氏菌)核酸的方法,以提高布鲁氏病(简称布病)的诊断能力.方法 设计MC核酸提取、PCR和DNA反向斑点杂交相结合的检测布氏菌DNA的全自动技术流程.设计微流控全自动核酸检测(MC-PCR)与基因测序符合性测试、与实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)、TaqMan探针法检测比较实验;评估MC-PCR法检测布氏菌的重复性、准确性、特异性、最低检出限.结果 研究组与对照组核酸溶解曲线图纵坐标峰值所对应的横坐标一致,呈现单一的溶解峰,温度相同,表示为相同的扩增产物.核酸不同提取方法之间Ct值差异有统计学意义(P<0.05).经两两比较,NaI(机提)的Ct值低于AXYGEN、天净沙、济凡、NaI(手提),差异有统计学意义(P<0.05);NaI(机提)的Ct值与全式金、天根、德诺杰亿差异无统计学意义(P>0.05).基因测序的Kappa值为0.659,与MC-PCR具有高度的一致性,MC-PCR与基因测序阳性结果符合率100％,总符合率82.5％.准确性:结果符合率为100％;特异性:结果阴性率100％;重复性:结果均可以检出布氏菌;检出限:浓度为825 copies/mL时,MC-PCR与qPCR、TaqMan探针法检出率差异有统计学意义(x2=24.699,P<0.05),经两两比较,MC-PCR检出率高于qPCR和TaqMan探针法.精密度:结果均可以检出布氏菌.结论 MC-PCR检测布氏菌核酸的检测方法安全、快捷、及时、精准,可以应用于临床.这将提高布病诊断率,对布鲁氏菌病的防治起到重要作用.

布鲁氏菌;微流控芯片;聚合酶链式反应;血清

李翔;董占柱;陈昊;孙欣;包春喜;李英智;牛艺卿;郝明媛;赵志军;杜彦丹

内蒙古民族大学第二临床学院,内蒙古通辽市科尔沁区第一人民医院检验科,内蒙古,通辽028000;内蒙古民族大学第二临床学院,内蒙古林业总医院检验科,内蒙古,牙克石022150;内蒙古民族大学第二临床学院,内蒙古林业总医院眼科,内蒙古,牙克石022150;内蒙古民族大学第二临床学院,内蒙古林业总医院心内科,内蒙古,牙克石022150;内蒙古民族大学第二临床学院,内蒙古林业总医院核医学科,内蒙古,牙克石022150;呼伦贝尔市传染病医院检验科,内蒙古,扎兰屯162650;内蒙古民族大学第二临床学院,内蒙古林业总医院普外科,内蒙古,牙克石022150

分子诊断与治疗杂志

[1]李翔;董占柱;陈昊;孙欣;包春喜;李英智;牛艺卿;郝明媛;赵志军;杜彦丹-.微流控芯片技术在布鲁氏菌检测中的应用)[J].分子诊断与治疗杂志,2022(05):731-735

AXYGEN

微流控芯片技术,MC,布氏菌,布病,诊断能力,核酸提取,反向斑点杂交,交相,技术流程,核酸检测,基因测序,符合性测试,实时荧光定量核酸扩增检测,qPCR,TaqMan,探针法,比较实验,低检出限,酸溶解,曲线图,纵坐标,横坐标,扩增产物,不同提取方法,Ct,NaI,天净沙,手提,天根,Kappa,符合率,阴性率,copies,x2,精密度,菌核,诊断率,布鲁氏菌病,聚合酶链式反应

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