目的 验证受体相互作用蛋白激酶1/受体相互作用蛋白激酶3/混合系激酶区域样蛋白(RIPK1/RIPK3/MLKL)信号通路参与介导视网膜色素上皮(RPE)细胞坏死性凋亡的过程,探索黄芩苷调控RPE细胞与RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路之间的关系.方法 采用细胞计数试剂-8(CCK8)实验测定黄芩苷0～200.0μmol/L的安全浓度范围、最佳有效浓度和最佳给药时间.将RPE细胞ARPE-19分成3组,对照组(CG)正常培养,模型组(MG)给予含1 mg/mL碘酸钠的完全培养基刺激,黄芩苷组(BG)在MG组基础上给予25.0μmol/L黄芩苷培养,3组均培养48 h.CCK-8法检测ARPE-19细胞活力;免疫荧光法观察细胞形态;Western Blot法检测各组细胞RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白的表达水平.结果(1)安全浓度范围:与0μmol/L组比较,黄芩苷50.0、100.0、200.0μmol/L组的细胞活力均降低(t50.0=3.236,P=0.032;t100.0=6.165,P=0.004;t200.0=7.840,P=0.001);与25.0μmol/L组比较,1.0、10.0、50.0μmol/L组的细胞活力差异无统计学意义(均P>0.05),0.1μmol/L组的细胞活力升高(t=4.848,P=0.008),100.0、200.0μmol/L组的细胞活力降低,差异有统计学意义(t100.0=9.714,P=0.001;t200.0=9.485,P=0.001).因此,黄芩苷的安全浓度范围为0～25.0μmol/L.(2)最佳给药浓度:当黄芩苷浓度为25.0μmol/L时,细胞活性最高,与0.1、1.0、10.0μmol/L浓度组比较,差异均有统计学意义(t0.1=8.987,P=0.001;t1.0=6.809,P=0.002;t10.0=3.320,P=0.029),故25.0μmol/L为黄芩苷最佳给药浓度.(3)最佳给药时间:与CG组比较,MG组24、48、72 h细胞活力均下降(t24 h=8.118,P=0.001;t48 h=12.330,t72 h=26.873,均P=0.000);与MG组比较,BG组24、48、72 h细胞活力均升高(t24 h=8.632,P=0.001;t48 h=12.148,t72 h=10.539,均P=0.000),差异均有统计学意义,故选择时间最短的24 h作为黄芩苷最佳给药时间.(4)细胞形态:在24、48、72 h时,CG组细胞核呈现强荧光,MG组细胞核呈现核浓缩,染色加深,部分细胞表现为核碎裂,BG组细胞核呈现强荧光,核碎裂现象减少.(5)RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路:与CG组比较,MG组RIPK1、RIPK3、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平升高(tRIPK1=7.352,P=0.002;tRIPK3=6.926,P=0.002;tHMGB1=3.785,P=0.019);与MG组比较,BG组RIPK1、RIPK3、HMGB1表达水平下降(tRIPK1=7.012,P=0.002;tRIPK3=6.085,P=0.004;tHMGB1=3.386,P=0.028),差异均有统计学意义.结论 RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路可能参与了RPE细胞的坏死性凋亡,黄芩苷可能通过调控RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路发挥抑制细胞坏死性凋亡的作用.

RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路;干性年龄相关性黄斑变性;视网膜色素上皮细胞;黄芩苷

王珍;李潆;吕海江;王露;郑博;李亚静

中国中医科学院眼科医院,北京100040;河南省郑州市骨科医院,郑州450015;河南中医药大学第三附属医院,郑州450003;河南省沈丘县卫生健康委员会,沈丘466399;河南省沈丘县德鸿中医院,沈丘466399

中国中医眼科杂志

[1]王珍;李潆;吕海江;王露;郑博;李亚静-.黄芩苷介导RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路对RPE细胞调控作用的研究)[J].中国中医眼科杂志,2022(11):846-852

t100,t200,t48,tRIPK1,tRIPK3,tHMGB1

黄芩苷,MLKL,细胞调控,受体相互作用蛋白激酶,混合系激酶区域样蛋白,导视,细胞坏死,坏死性凋亡,CCK8,实验测定,安全浓度,有效浓度,给药时间,ARPE,CG,碘酸,BG,细胞活力,免疫荧光法,细胞形态,Blot,t50,给药浓度,细胞活性,t0,t24,t72,择时,时间最短,细胞核,碎裂,高迁移率族蛋白,干性年龄相关性黄斑变性,视网膜色素上皮细胞

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