目的:探讨柚皮苷通过环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)通路促进人脂肪间充质干细胞成骨分化的作用.方法:取人脂肪间充质干细胞培养传代,将细胞分为对照组、柚皮苷低、中、高剂量组、cAMP抑制剂(SQ22536)组、成骨分化诱导组(诱导组),柚皮苷低、中、高剂量组分别加12.5μmoL/L、25μmoL/L、50μmoL/L柚皮苷,SQ22536组加100μmoL/L SQ22536,诱导组加10～8moL/L地塞米松、10mmoL/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸;对照组仅加等体积培养液,每组设置6个复孔.培养48h后,碱性磷酸酶(ALP)染色,磷酸对硝基苯酯(PNPP)法检测各组细胞ALP活性;茜素红S(ARS)染色观察各组细胞钙沉积情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞cAMP水平;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞PKA、CREB、矮小相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)信使核糖核酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(WB)检测各组细胞PKA、CREB、RUNX2、OCN、OPN蛋白表达及p-PKA、p-CREB水平.结果:ALP染色后显示对照组细胞可见少量蓝色沉淀,SQ22536组蓝色沉淀最少,诱导组和柚皮苷3剂量组蓝色沉淀逐渐增多;与对照组比,SQ22536组ALP活性显著下降(P<0.01);与对照组和SQ22536组比,诱导组和柚皮苷3剂量组ALP活性显著上升(P<0.01);对照组存在少量钙沉积,SQ22536组细胞钙沉积显著减少,诱导组和柚皮苷3剂量组钙沉积逐渐增多;与对照组比,SQ22536组细胞cAMP水平、PKA、CREB、RUNX2、OCN、OPN mRNA和蛋白表达及p-PKA、p-CREB水平显著下降(P<0.01);与对照组和SQ22536组比,诱导组和柚皮苷3剂量组cAMP水平、PKA、CREB、RUNX2、OCN、OPN mRNA和蛋白表达及p-PKA、p-CREB水平上升,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);诱导组和柚皮苷低剂量组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);上述指标柚皮苷呈剂量依赖性.结论:柚皮苷可促进人脂肪间充质干细胞成骨分化,可能与激活cAMP/PKA/CREB信号通路,促进RUNX2、OCN、OPN表达,上调ALP活性相关.

脂肪间充质干细胞;柚皮苷;环磷酸腺苷;蛋白激酶A;cAMP反应元件结合蛋白;成骨分化

张亮亮;赵程锦;周煜虎;曹博;段明明;冯阳阳

延安大学附属医院创伤骨科, 陕西 延安 716000

河北医学

[1]张亮亮;赵程锦;周煜虎;曹博;段明明;冯阳阳-.柚皮苷通过cAMP/PKA/CREB通路促进人脂肪间充质干细胞成骨分化)[J].河北医学,2022(10):1597-1603

8moL,10mmoL

柚皮苷,cAMP,PKA,CREB,人脂肪间充质干细胞,成骨分化,环磷酸腺苷,蛋白激酶,反应元件,结合蛋白,干细胞培养,传代,高剂量,SQ22536,分化诱导,别加,地塞米松,甘油磷酸钠,50mg,抗坏血酸,加等,培养液,48h,碱性磷酸酶,ALP,硝基苯,PNPP,茜素红,ARS,酶联免疫吸附试验,实时定量聚合酶链反应,qPCR,矮小,RUNX2,骨钙素,OCN,骨桥蛋白,OPN,信使核糖核酸,蛋白质免疫印迹,免疫印迹法,WB,蓝色,剂量依赖,量依赖性,活性相

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