典型文献
溶酶体代谢酶甘露糖-6-磷酸糖基化修饰关键酶UCE的异源表达及功能鉴定
文献摘要：
目的 利用大肠杆菌表达系统对溶酶体代谢酶甘露糖-6-磷酸(M6P)糖基化修饰的关键酶N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸二酯 α-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶(UCE)进行异源表达和功能鉴定.方法 通过UCE的氨基酸序列分析,分别截去UCE的信号肽、前体肽、跨膜区、胞浆尾肽等结构域,形成不同形式的截短型UCE.利用促溶标签麦芽糖结合蛋白(MBP)的载体和大肠杆菌表达系统,对不同的截短型UCE进行表达.将表达的可溶性融合蛋白利用Ni2+离子琼脂糖凝胶进行亲和层析纯化,并利用UDP-Glo试剂盒测定融合蛋白的活性.结果 截短型的UCE-MBP融合蛋白能够被可溶性地融合表达,并且能够利用Ni2+离子琼脂糖凝胶进行亲和层析纯化.去掉其前体肽和仅保留核心区的UCE融合蛋白能够展现出较高的活性.结论 利用促溶标签蛋白能够实现UCE在大肠杆菌中可溶性地融合表达,从而能够快速制备大量的UCE,该酶可用于对溶酶体代谢酶体外糖基化的生物催化修饰.
文献关键词：
溶酶体代谢酶;N-糖基化;N-乙酰葡萄糖胺-1-磷酸二酯α-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶;异源表达
中图分类号：
作者姓名：
曹筠嵩;杨燕;刘忞之;王伟
作者机构：
100050 北京,中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/国家卫生和计划生育委员会天然药物生物合成重点实验室
文献出处：
引用格式：
[1]曹筠嵩;杨燕;刘忞之;王伟-.溶酶体代谢酶甘露糖-6-磷酸糖基化修饰关键酶UCE的异源表达及功能鉴定)[J].中国医药生物技术,2022(06):481-487
A类：
溶酶体代谢酶,UCE,M6P,体外糖基化
B类：
甘露糖,糖基化修饰,关键酶,异源表达,功能鉴定,大肠杆菌表达,表达系统,磷酸二酯,糖苷酶,表达和功能,氨基酸序列,序列分析,截去,信号肽,前体肽,结构域,促溶,麦芽糖,结合蛋白,MBP,融合蛋白,Ni2+,琼脂糖凝胶,亲和层析,层析纯化,UDP,Glo,试剂盒,融合表达,去掉,核心区,标签蛋白,快速制备,生物催化
AB值：
0.242292
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
