典型文献
昆虫细胞表达的HPV⁃58 L1病毒样颗粒的层析纯化及免疫原性分析
文献摘要：
目的 探索利用昆虫杆状病毒表达系统(IBEVS)表达的重组人乳头瘤病毒(HPV)58型主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒(VLP)的简单可行的层析分离方法.方法 收集高水平表达HPV?58 L1的昆虫细胞并制备裂解上清,建立硫酸铵沉淀(ASP)联合层析法纯化L1蛋白的最佳条件,对纯化后的蛋白进行体外组装.对L1蛋白的纯化各个阶段中的组分、最终产品(纯品蛋白)及组装状态进行理化性质鉴定,分析其免疫原性.结果 30％饱和硫酸铵(AS)分级分离后,L1蛋白得率为72％,纯度为9.34％;阴离子交换层析经300 mmol/L NaCl缓冲液洗脱后,L1蛋白得率>90％,纯度为13.6％;进一步经羟基磷灰石层析收获流穿液后,L1蛋白得率>80％,宿主蛋白质残留(HCPs)分析和L1蛋白的SDS?PAGE考马斯亮蓝染色显示蛋白纯度>99％.经上述3步分离纯化的L1蛋白,其总得率为55.7％,每升细胞悬浮培养液(约3.0×109个细胞)产量为57～65 mg.动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析显示,L1蛋白组装成了形状均一、直径约55 nm的VLPs.该法制备HPV?58 L1 VLPs诱导小鼠免疫系统产生的中和抗体水平与超离法制备的相当.结论 本研究所建立的HPV58?L1 VLPs分离纯化方法是一套具有蛋白得率高、活性好,且操作简单等特点的成熟方案,为利用IBEVS生产成本低的HPV多价预防性疫苗奠定基础.
文献关键词：
人乳头瘤病毒58型;主要衣壳蛋白L1;病毒样颗粒(VLP);昆虫细胞;纯化
中图分类号：
作者姓名：
王志荣;张婷;许雪梅
作者机构：
中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物物理及结构生物学系, 北京100005
文献出处：
引用格式：
[1]王志荣;张婷;许雪梅-.昆虫细胞表达的HPV⁃58 L1病毒样颗粒的层析纯化及免疫原性分析)[J].基础医学与临床,2022(05):763-767
A类：
IBEVS
B类：
昆虫细胞表达,L1,病毒样颗粒,层析纯化,免疫原性,昆虫杆状病毒表达系统,组人,人乳头瘤病毒,衣壳蛋白,层析分离,分离方法,上清,ASP,层析法,最佳条件,蛋白的纯化,各个阶段,性质鉴定,饱和硫酸铵,分级分离,得率,阴离子交换层析,NaCl,缓冲液,洗脱,羟基磷灰石,宿主蛋白,HCPs,SDS,PAGE,考马斯亮蓝,蓝染,蛋白纯度,经上述,分离纯化,总得,细胞悬浮培养,培养液,动态光散射,DLS,透射电镜,TEM,蛋白组,装成,均一,直径约,VLPs,免疫系统,中和抗体,抗体水平,HPV58,纯化方法,多价,预防性疫苗
AB值：
0.346799
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