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带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定
文献摘要：
目的 表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性.方法 在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况.结果 成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白.通过细胞毒实验,证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱,mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致,确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值.将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞,观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合,证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感.将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞,mScarlet-ETX只与人红细胞结合.结论 mScarlet-ETX具有良好的毒素活性,可应用于对ETX毒性研究的多个方面.
文献关键词：
产气荚膜梭菌;ε毒素;eGFP标签;mScarlet标签;融合蛋白
中图分类号：
作者姓名：
郭子槊;吕若梅;黄静;柳婷婷;陈铭;康琳;王景林;辛文文
作者机构：
军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室,北京 100071
文献出处：
引用格式：
[1]郭子槊;吕若梅;黄静;柳婷婷;陈铭;康琳;王景林;辛文文-.带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定)[J].军事医学,2022(10):744-748
A类：
mScarlet,HEKa
B类：
光标签,产气荚膜梭菌,融合蛋白,蛋白纯化,表达纯化,eGFP,Clostridium,perfringens,ETX,大肠杆菌,MTS,共聚焦显微镜,HaCaT,过细,细胞毒,未加,His,荧光值,毒性研究
AB值：
0.143118
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