目的 探讨PM2.5对Raw264.7巨噬细胞自噬及炎症反应的影响及机制.方法 CCK-8检测PM2.5对Raw264.7巨噬细胞活性的影响,透射电镜观察自噬结构;Ad-mCherry-GFP-LC3B转染细胞后荧光显微镜观察自噬通量,以探讨PM2.5对巨噬细胞活性和自噬流的影响.再设置对照组、PM2.5组、雷帕霉素(Rap,自噬诱导剂)组、羟氯喹(HCQ,自噬抑制剂)组、PM2.5+HCQ组、PM2.5+TAK-242[Toll样受体4(TLR4)抑制剂]组.Western blot法检测自噬相关蛋白,包括微管相关轻链蛋白3比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、p62、组织蛋白酶B(CTSB)、溶酶体膜蛋白2(LAMP2)和炎症相关蛋白,包括Toll样受体4(TLR4)、核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)的表达水平;酶联免疫吸附试验检测相关炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-10分泌水平.结果 Raw264.7巨噬细胞活性随着PM2.5浓度的增加和作用时间的延长而降低.透射电镜观察到PM2.5组有较多自噬空泡和双膜自噬体,自噬溶酶体少见,且荧光显微镜下PM2.5组绿色荧光淬灭不明显,Merge后黄红色荧光比值高于对照组和Rap组(P<0.05).相较于对照组,PM2.5组NLRP3、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、CTSB、IL-1β、IL-18的表达上调,LAMP2、IL-10表达下调(P<0.05),而HCQ抑制自噬的同时,促进NLRP3、IL-1β、IL-18的表达,抑制IL-10表达(P<0.05).相较于对照组、PM2.5组和HCQ组,PM2.5+HCQ组NLRP3、IL-1β、IL-18的上调及IL-10下调更为显著(P<0.05).此外,PM2.5组TLR4表达高于对照组,TAK-242抑制TLR4后NLRP3、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、CTSB、IL-1β、IL-18的表达较PM2.5组下调,LAMP2和IL-10的表达上调(P<0.05).结论 PM2.5可呈时间和浓度依赖性地降低巨噬细胞活性;且PM2.5诱导Raw264.7巨噬细胞发生自噬,但阻断自噬流,加重巨噬细胞炎症反应,且该过程可能由TLR4介导.

颗粒物;自噬;炎症;Toll样受体4;NLR家族;热蛋白结构域包含蛋白3;动脉粥样硬化;PM2.5

黄秋阳;王伟;罗书;郑文武;冯健;叶强;郑舒展

西南医科大学附属医院心血管内科 646000;四川省泸州市生态环境监测中心站

天津医药

[1]黄秋阳;王伟;罗书;郑文武;冯健;叶强;郑舒展-.PM2.5通过TLR4破坏自噬流加重Raw264.7巨噬细胞炎症反应)[J].天津医药,2022(11):1139-1145

5+HCQ,5+TAK

PM2,TLR4,自噬流,Raw264,巨噬细胞,细胞炎症,细胞自噬,CCK,细胞活性,透射电镜,电镜观察,Ad,mCherry,GFP,LC3B,转染,荧光显微镜观察,雷帕霉素,Rap,自噬诱导剂,羟氯喹,自噬抑制剂,Toll,样受体,blot,自噬相关蛋白,微管,轻链,p62,组织蛋白酶,CTSB,溶酶体膜蛋白,LAMP2,炎症相关蛋白,受体蛋白,NLRP3,酶联免疫吸附试验,试验检测,炎性因子,泌水,作用时间,空泡,双膜,自噬体,自噬溶酶体,显微镜下,荧光淬灭,Merge,红色荧光,光比,浓度依赖性,颗粒物,蛋白结构域,动脉粥样硬化

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