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VPAHPND毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化
文献摘要：
急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease,AHPND)是一种新型对虾病害,其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VPAHPND),可感染对虾且致死率高.本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物,通过PCR获得目的基因pirA、pirB、pirAB并克隆至表达载体pET 21b(+)中,构建BL21-pET21b-pirA、BL21-pET21b-pirB、BL21-pET21b-pirAB原核表达体系;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,分析重组蛋白的最佳表达条件;采用Ni磁珠对重组蛋白进行纯化,并以Western-blot方法分析其抗原性.结果表明,PirA、PirB、PirAB的重组蛋白分子质量分别约为17 kDa、50 kDa和(50+17)kDa,与预期大小一致.重组蛋白的最佳诱导条件:IPTG浓度0.01 mmol/L,PirA和PirAB 30℃诱导24 h、PirB 30℃诱导4 h,蛋白均呈现可溶性表达;纯化后的重组蛋白具有较好的反应原性,可为下一步的抗体制备和AHPND致病机理研究提供充足的实验材料.
文献关键词：
AHPND;pir AB基因;毒力蛋白;副溶血弧菌;原核表达
中图分类号：
作者姓名：
范贤平;张晟;蒋葛;曹晓慧;乔毅;成婕;徐军田;胡闯显;沈辉
作者机构：
江苏海洋大学海洋生命与水产学院,江苏连云港 222000;江苏省海洋水产研究所,江苏南通 226007;江苏农垦金鲤渔业有限公司,江苏盐城 224500
文献出处：
引用格式：
[1]范贤平;张晟;蒋葛;曹晓慧;乔毅;成婕;徐军田;胡闯显;沈辉-.VPAHPND毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化)[J].广西科学,2022(06):1103-1110
A类：
PirAB,Hepatopancreatic,pirAB,pirA,pirB,pET21b,PirA,50+17
B类：
VPAHPND,毒力蛋白,原核表达,急性肝胰腺坏死病,Acute,Necrosis,Disease,对虾,原为,毒素蛋白,致死率,研究利用,GenBank,全基因序列,序列设计,特异性引物,目的基因,表达载体,BL21,表达体系,诱导剂,诱导时间,重组蛋白,磁珠,blot,抗原性,PirB,分子质量,kDa,诱导条件,IPTG,可溶性表达,反应原性,抗体制备,致病机理,实验材料,副溶血弧菌
AB值：
0.284948
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