目的:设计并制备一种分别靶向B细胞表面抗原CD19和CD22的CAR-T细胞,检测其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果.方法:将含有人源化CD19 ScFv的二代CAR分子和带有CD3s链作为共刺激结构域的CD22 ScFv CAR分子以P2A自剪切肽连接,序列连接于慢病毒载体pLTR-CMV-MCS中,以HEK-293T细胞包装相应的慢病毒载体,感染健康志愿者提供的T细胞制备CAR-19-22-T细胞,同时以相同二代结构分别构建单靶向CAR-T细胞作为参照.构建表达荧光素酶、CD19和/或CD22的前列腺癌3M细胞(靶细胞).将各种CAR-T细胞与靶细胞共同培养,采用荧光素酶化学发光法和ELISA法检测其对靶细胞的杀伤能力和细胞因子的分泌水平.通过尾静脉注射Raji-Luc细胞构建NOD-SCID免疫缺陷小鼠白血病模型,分别注射各组CAR-T细胞进行治疗并评估其疗效.结果:培养7 d的CAR-19-22-T细胞的CAR-19表达率为13.7％,CAR-22表达率为14.3％.CAR-19-22-T细胞在10:1效靶比时,对3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc和3M-CD19-CD22-Luc细胞的杀伤率均显著高于 T细胞[(78.1±14.4)％vs(11.1±4.3)％、(46.7±10.7)％vs(12.4±2.7)％、(90.5±4.3)％vs(14.3±3.7)％,均P＜0.01];与 3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc、3M-CD19-CD22-Luc靶细胞共培养后,CAR-19-22-T 细胞 IFN-γ、TNF-α和 IL-2 水平均显著低于 CAR-19-T 和 CAR-22-T 细胞(P＜0.05 或 P＜0.01).CAR-19-22-T 细胞对移植Raji-Luc细胞模型小鼠治疗效果明显,其生存期显著长于T细胞组(P＜0.01),与CAR-19-T组和CAR-22-T组荷瘤小鼠比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论:成功设计并制备了一种双靶点CAR-19-22-T细胞,其能够有效杀伤表达CD19和/或CD22抗原的肿瘤细胞,对Raji-Luc细胞的白血病模型小鼠有显著的治疗效果.

CD19;CD22;双靶点CAR-T细胞;淋巴细胞白血病;靶向治疗

李薇;曾伟杰;彭浩;刘灿;刘广花;肖非笛;曾桂芳;梁晓;蔡车国;胡隽源;周明

湖南省人民医院(湖南师范大学附属第一医院)血液内科,湖南长沙410005;深圳市北科生物科技有限公司,广东深圳518057

中国肿瘤生物治疗杂志

[1]李薇;曾伟杰;彭浩;刘灿;刘广花;肖非笛;曾桂芳;梁晓;蔡车国;胡隽源;周明-.CD19和CD22双靶点CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用)[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2022(07):623-630

CD3s,pLTR

CD19,CD22,CAR,肿瘤细胞,杀伤作用,细胞表面,表面抗原,体内外,人源化,ScFv,共刺激,结构域,P2A,慢病毒载体,CMV,MCS,HEK,293T,装相,健康志愿者,建表,荧光素酶,前列腺癌,3M,靶细胞,化学发光法,对靶,泌水,尾静脉注射,Raji,Luc,NOD,SCID,免疫缺陷小鼠,细胞共培养,IFN,细胞模型,模型小鼠,生存期,荷瘤小鼠,淋巴细胞白血病,靶向治疗

0.23962