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shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞构建及其功能的初步鉴定
文献摘要：
目的:探讨shRNA靶向抑制CD38的方法能否增强抗CD38 CAR-T细胞的抗癌功能.方法:构建shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞的CAR分子,利用逆转录病毒载体包装成功后转导人原代T细胞,制备CAR-T细胞.实验分为shRNA1 CD38 CAR-T组、shRNA2 CD38 CAR-T组和对照组(shR-NC-CD38 CAR-T细胞).采用qPCR法检测CAR-T细胞CD38 mRNA相对表达水平,计算CAR-T细胞培养0～14d的增殖倍数,CFSE法检测CAR-T细胞与人Burkitt淋巴瘤细胞Raji-luc或人多发性骨髓瘤外周血B淋巴细胞RPMI-8226-1uc共培养时的增殖情况,荧光素酶化学发光法检测CAR-T细胞在不同效靶比(1:1、1:2、1:4、1:8)时对Raji-luc和RPMI-8226-1uc细胞的杀伤效率,ELISA法检测CAR-T细胞杀伤Raji-luc或RPMI-8226-1uc细胞时上清液中IFN-γ水平,FCM检测CAR-T细胞表面耗竭T细胞生物标志物PD-1的表达水平.结果:shR-NC-CD38 CAR、shRNA1-CD38 CAR和shRNA2-CD38 CAR逆转录病毒载体的滴度均为1×107拷贝/mL,转导T细胞后,shR-NC-CD38 CAR-T、shRNA1-CD38 CAR-T和shRNA2-CD38 CAR-T细胞的转导效率(CAR的阳性率)分别为60.3％、67.0％和57.4％.与对照组比较,shRNA2-CD38 CAR-T组细胞中CD38 mRNA的表达水平显著降低(P＜0.01),显示shRNA-CD38 CAR-T细胞构建成功.shRNA2-CD38 CAR-T组细胞在体外培养增殖能力更强(P＜0.05),对2种CD38阳性的肿瘤细胞的杀伤效率更高(均P＜0.05)、IFN-γ释放水平更高(均P＜0.05)、细胞表面PD-1的表达水平更低(P＜0.05).结论:成功构建一种shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞,其抗癌功能表现出明显的优势.
文献关键词：
淋巴瘤;多发性骨髓瘤;CD38;嵌合抗原受体;T细胞;RNA干扰
中图分类号：
作者姓名：
刘秀盈;冯娅茹;周雅婷;王建勋
作者机构：
北京中医药大学生命科学学院,北京102488;深圳北京中医药大学研究院,广东深圳518118
文献出处：
引用格式：
[1]刘秀盈;冯娅茹;周雅婷;王建勋-.shRNA靶向抑制CD38的抗CD38 CAR-T细胞构建及其功能的初步鉴定)[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2022(01):11-17
A类：
1uc
B类：
靶向抑制,CD38,CAR,抗癌,逆转录病毒载体,装成,原代,shRNA1,shRNA2,NC,qPCR,相对表达,细胞培养,14d,增殖倍数,CFSE,Burkitt,淋巴瘤细胞,Raji,luc,多发性骨髓瘤,RPMI,共培养,荧光素酶,化学发光法检测,杀伤,上清液,IFN,FCM,细胞表面,耗竭,生物标志物,滴度,拷贝,转导效率,体外培养,肿瘤细胞,放水,功能表现,嵌合抗原受体
AB值：
0.211789
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