草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(GCRV)引起的草鱼养殖业一种严重的病毒性出血病,给草鱼养殖产业造成重大损失.该病毒是一种双链分节段RNA病毒,根据GCRV多个病毒分离株基因序列分析及临床发病特点,共有三种基因型GCRV,其中基因Ⅰ型和Ⅱ型较为流行.通过细胞分离培养基因Ⅰ型(GCRV-ZV8909)和Ⅱ型(GCRV-HZ13)GCRV,研制出草鱼出血病二价细胞灭活疫苗,通过绝对定量的方法,测定基因Ⅰ型和Ⅱ型的病毒含量分别为2.0×109及1.5×106copies/mL.用生理盐水将其分别进行50倍稀释和100倍稀释,包括原液及生理盐水对照共4组,分别腹腔注射免疫(20±5)g健康草鱼,剂量均为0.2 mL/尾,每组40尾,各组于免疫后3、5、7、14、21、28、42、56、70、84d分别取3尾采集血液制备血清.分别利用经原核表达并纯化制备两种基因型GCRV的VP7蛋白以及实验室保存的草鱼IgM单抗,建立了三抗体夹心酶联免疫方法(TAS-ELISA)分析评价疫苗体液免疫效果.结果表明,草鱼经腹腔注射不同剂量的细胞灭活疫苗后,与对照组相比,各免疫组血清抗体均有不同程度的提高,且原液组与50倍稀释组基本持平,但都高于100倍稀释组,各免疫组在免疫后5d即可检测到两种基因型GCRV抗体,且抗体水平持续到84d,但两种基因型抗体水平达到高峰的时间不一致,抗基因Ⅰ型GCRV抗体达到高峰是在28 d,抗基因Ⅱ型GCRV抗体是在14 d达到高峰.两种基因型抗体水平达到高峰时的血清效价分别为1:800、1:600.免疫保护率实验结果表明,原液组保护率最高,为67％,50倍稀释组为60％,100倍稀释组只有33％.

草鱼呼肠孤病毒(GCRV);三抗体夹心酶联免疫方法(TAS-ELISA);体液免疫;免疫保护率

郝贵杰;林锋;黄爱霞;叶霆;姚嘉赟;潘晓艺;袁雪梅;徐磊;胡金春;沈锦玉

农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室 浙江省鱼类健康与营养重点实验室 浙江省淡水水产研究所 浙江湖州313001;衢州市水产技术推广中心 浙江衢州324000

海洋与湖沼

[1]郝贵杰;林锋;黄爱霞;叶霆;姚嘉赟;潘晓艺;袁雪梅;徐磊;胡金春;沈锦玉-.草鱼(Ctenopharyngodonidellus)出血病二价细胞灭活疫苗体液免疫效果及免疫保护率评价研究)[J].海洋与湖沼,2022(06):1467-1475

Ctenopharyngodonidellus,ZV8909,HZ13,106copies

二价,灭活疫苗,体液免疫,免疫效果,免疫保护率,草鱼出血病,草鱼呼肠孤病毒,GCRV,养殖业,病毒性,养殖产业,重大损失,双链,分节,节段,病毒分离,分离株,基因序列分析,临床发病,发病特点,基因型,过细,细胞分离,分离培养,绝对定量,病毒含量,生理盐水,原液,腹腔注射,84d,血液制备,备血,原核表达,VP7,IgM,单抗,夹心,免疫方法,TAS,经腹腔,不同剂量,血清抗体,持平,5d,抗体水平,时间不一致,效价

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