典型文献
双峰驼TLR2多克隆抗体的制备及其在免疫组化检测中的应用
文献摘要：
为了制备兔抗双峰驼Toll样受体2(TLR2)的多克隆抗体并鉴定其活性,试验选择双峰驼TLR2基因序列,选取编码区,经软件分析预测该区域编码蛋白的主要氨基酸抗原位,选择对应的核苷酸序列进行基因合成,构建双峰驼TLR2重组质粒(pET28a-TLR2);通过原核表达系统诱导pET28a-TLR2表达,并优化异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)表达条件;表达的蛋白溶解变性后,与Ni-NTA镍柱填料结合,经亲和层析法纯化,用纯化后的蛋白免疫新西兰白兔并制备多克隆抗体;利用SDS-PAGE鉴定蛋白表达和纯化情况,间接ELISA试验、Western blot检测及免疫组化验证并评价多克隆抗体的效价与反应性.结果表明:成功表达双峰驼TLR2重组蛋白,大小约为64kDa,最佳诱导表达条件:IPTG浓度为0.4mol/L、诱导时间为5 h,蛋白质以包涵体的形式表达;抗体效价为1∶256 000,能特异性识别目的蛋白;在双峰驼十二指肠肠系膜淋巴结和脾脏中,抗体能特异性识别双峰驼TLR2阳性细胞,细胞类型以单核/巨噬细胞为主,具有良好的特异反应性.说明成功制备的兔抗双峰驼TLR2多克隆抗体具有良好的特异反应性并能用于TLR2的免疫组化检测.
文献关键词：
双峰驼;TLR2;原核表达;抗体制备;表达定位
中图分类号：
作者姓名：
刘转霞;李沛轩;张睿;刘静宇;陆佳;谢飞;王雯慧
作者机构：
甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070
文献出处：
引用格式：
[1]刘转霞;李沛轩;张睿;刘静宇;陆佳;谢飞;王雯慧-.双峰驼TLR2多克隆抗体的制备及其在免疫组化检测中的应用)[J].畜牧与兽医,2022(12):49-56
A类：
64kDa
B类：
双峰驼,TLR2,多克隆抗体,免疫组化检测,Toll,样受体,基因序列,编码区,分析预测,编码蛋白,基因合成,重组质粒,pET28a,原核表达,表达系统,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,解变,NTA,填料,亲和层析,层析法,新西兰白兔,SDS,PAGE,blot,化验,反应性,重组蛋白,诱导表达,4mol,诱导时间,包涵体,抗体效价,特异性识别,目的蛋白,十二指肠,肠系膜,淋巴结,脾脏,阳性细胞,细胞类型,巨噬细胞,抗体制备,表达定位
AB值：
0.28339
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