典型文献
牛星状病毒ORF2基因遗传进化分析及原核表达
文献摘要：
为了解牛星状病毒(bovine astrovirus,BoAstV)ORF2基因的遗传进化并获得原核表达的衣壳蛋白,从牛腹泻粪便中提取总RNA,扩增BoAstVORF2基因,将ORF2基因克隆至pMD19-T载体中并测序,利用生物信息学软件分析基因的遗传进化.将位于BoAstV衣壳蛋白高度保守区的ORF2-1200基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET28a-ORF2-1200.将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达并优化诱导条件,经过超声破碎离心并鉴定蛋白可溶性,最后利用亲和层析镍柱对重组蛋白进行纯化和Western blot鉴定.结果表明:ORF2基因全长2 304bp,编码768 aa,ORF2基因属MAstV-28基因型,与日本毒株Ishikawa24-6亲缘关系最近,与20个参考毒株的ORF2基因氨基酸同源性为53.2％～86.0％.试验成功构建了重组载体,经条件优化,在37℃,1.0 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小55 kDa左右,目的蛋白以包涵体形式存在,Western blot检测目的蛋白正确表达.本试验通过分析BoAstV ORF2基因的遗传进化情况,明确MAstV-28型BoAstV在中国的流行;对ORF2基因保守区域进行克隆和原核表达及纯化,成功获得了重组蛋白,为深入研究蛋白功能和建立BoAstV血清学检测方法奠定了基础.
文献关键词：
牛星状病毒;ORF2;遗传进化分析;原核表达
中图分类号：
作者姓名：
武琦;周金柱;钟纯燕;李基棕;李科茫;索朗斯珠;贡嘎;李彬
作者机构：
西藏农牧学院动物科学学院,西藏林芝 860000;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,江苏南京 210014;黔西南民族职业技术学院,贵州兴义 562400;南京农业大学动物医学院,江苏南京 210014
文献出处：
引用格式：
[1]武琦;周金柱;钟纯燕;李基棕;李科茫;索朗斯珠;贡嘎;李彬-.牛星状病毒ORF2基因遗传进化分析及原核表达)[J].畜牧与兽医,2022(10):81-88
A类：
BoAstV,BoAstVORF2,304bp,MAstV,Ishikawa24
B类：
牛星状病毒,基因遗传,遗传进化分析,bovine,astrovirus,衣壳蛋白,牛腹泻,粪便,基因克隆,pMD19,利用生物,生物信息学软件,原核表达载体,pET28a,重组载体,大肠杆菌,BL21,DE3,感受态,诱导表达,诱导条件,超声破碎,亲和层析,重组蛋白,blot,全长,aa,基因型,毒株,亲缘关系,同源性,条件优化,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,下蛋,目的蛋白,kDa,包涵体,检测目的,蛋白功能,血清学检测
AB值：
0.265244
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