为研制一种快速检测北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的免疫层析试纸条(ICS),本研究以红色乳胶微球偶联的PRRSV N蛋白单克隆抗体(MAb)1H4为检测抗体,并包被在结合垫上,以MAb1H4和羊抗鼠IgG为捕获抗体,并分别包被在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,经各反应条件的优化建立了检测PRRSV的乳胶微球ICS.各反应条件优化结果显示,乳胶微球偶联的MAb即检测抗体浓度为1.5mg/mL,检测线MAb即检测线捕获抗体的浓度为2.0mg/mL,质控线羊抗鼠IgG即质控线捕获抗体的浓度为1.0 mg/mL.特异性试验结果显示,该方法可特异性检测我国出现的高致病性、NADC30-like、NADC34-like等北美型PRRSV代表株,与欧洲型PRRSV DV疫苗株及猪的其他常见病毒(CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PPV)均无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对系列稀释PRRSV(1050 TCID50/mL～2.5×1020 TCID50/mL)的最低检测限为5×1020 TCIDs0/mL,对2倍倍比稀释的重组N蛋白(rN,24 000ng/mL～3.75ng/mL)的最低检测限为15ng/mL;重复性试验结果显示,同一批次和不同批次试纸条的检测结果均无差异;对不同类型北美型PRRSV株(高致病性株、NADC30-like株、类高致病性株)感染的猪血清检测结果显示,利用该ICS可以从相应猪血清中检测到不同北美型的PRRSV.对采集的108份疑似PRRSV感染的猪肺组织及血清样品分别采用本研究建立的ICS及本研究室建立的PCR方法检测,结果显示,ICS检测的阳性率为37.03％(40/108),PCR检测的阳性率为42.59％(46/108),二者的总体符合率为83.33％.上述结果表明,该方法可以用于我国PRRSV主要流行株及临床样品的检测.本研究首次以同一株MAb分别作为检测抗体和检测线捕获抗体,建立检测PRRSV的乳胶微球ICS,为现地PRRSV流行病学调查及临床快速检测提供了新的技术手段.

猪繁殖与呼吸综合征病毒;北美型;N蛋白;免疫层析试纸条

李宛生;李敏华;张洪亮;李超;许浒;付军;龚帮俊;郭镇洋;刘建波;彭金美;周国辉;王倩;田志军

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150069;北京爱德士元亨生物科技有限公司,北京 101318

中国预防兽医学报

[1]李宛生;李敏华;张洪亮;李超;许浒;付军;龚帮俊;郭镇洋;刘建波;彭金美;周国辉;王倩;田志军-.北美型猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫层析试纸条的研制及初步应用)[J].中国预防兽医学报,2022(08):842-849

1H4,MAb1H4,TCIDs0

北美型,猪繁殖与呼吸综合征病毒,免疫层析试纸条,初步应用,快速检测,PRRSV,ICS,乳胶微球,偶联,单克隆抗体,检测抗体,包被,IgG,捕获抗体,纤维素膜,检测线,质控,反应条件优化,抗体浓度,5mg,0mg,特异性检测,高致病性,NADC30,like,NADC34,代表株,疫苗株,常见病,CSFV,PRV,PCV2,PEDV,TGEV,PPV,交叉反应,敏感性试验,TCID50,检测限,rN,000ng,75ng,15ng,重复性试验,猪血,血清检测,肺组织,清样,研究室,符合率,主要流行株,一株,流行病学调查

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