目的:探讨RAS蛋白家族在维持T-ALL细胞株体外生长中的功能.方法:纯化T-ALL细胞株DNA,利用PCR法扩增3个RAS基因(KRAS、NRAS、HRAS)的编码区.经T-A克隆后,Sanger法对KRAS、NRAS、HRAS基因编码区测序.将siRNA克隆到pSEH-361载体,在HEK-293T细胞中与pAMPHO和pVSVG 一起包装成逆转录病毒,随后感染T-ALL细胞.qRT-PCR和Western blot检测基因表达情况.利用Annexin V-PE/7-AAD染色T-ALL细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况.利用Hoechst 33258染色T-ALL细胞,流式细胞术检测细胞周期分布情况.经抗体染色,荧光显微镜观察cleaved-Caspase3蛋白的表达.结果:在T-ALL细胞株中,除Loucy和P12-ICH细胞KRAS基因发生c.6187G＞A(p.KRASG12D)突变,其余RAS基因均未发现错义突变.除PEER细胞(IC50=47.916 μmol/L)外,泛RAS抑制剂Compound 3144对其它T-ALL细胞均有一定杀伤作用.同样,除 PEER细胞(IC50=94.2265μmol/L)外,Tipifarnib可诱导多种T-ALL细胞凋亡.抑制KRAS表达后,T-ALL细胞凋亡明显,细胞周期阻滞.结论:KRAS蛋白维持T-ALL细胞株体外生长,是治疗T-ALL的潜在药物靶点.

RAS;急性T淋巴细胞白血病;细胞增殖;细胞凋亡

柳梓杨;舒逸;傅国;苏虹宇;朱丹;曾腊梅;马德禹;邹琳

重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心,国家儿童健康与疾病临床医学研究中心,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿科学重庆市重点实验室,重庆400014;上海交通大学附属儿童医院临床研究中心,上海交通大学医学院儿童感染免疫与重症医学研究院,上海200062

中国实验血液学杂志

[1]柳梓杨;舒逸;傅国;苏虹宇;朱丹;曾腊梅;马德禹;邹琳-.KRAS对T-ALL细胞株增殖及凋亡的影响)[J].中国实验血液学杂志,2022(04):1040-1048

pSEH,pAMPHO,pVSVG,Loucy,6187G,KRASG12D,Tipifarnib

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