目的 采用Accutase酶分离适合膜片钳记录的人诱导多能干细胞来源心肌细胞,并对其电生理学特性进行分析.方法 将人诱导多能干细胞在体外分化为心肌细胞.选择培养28～32天活性良好的心肌细胞,免疫细胞化学检测心肌细胞肌钙蛋白(cT N T)和肌动蛋白(α-actin)表达,膜片钳全细胞技术记录人诱导多能干细胞来源心肌细胞的动作电位.记录动作电位前采用Accutase酶将人诱导多能干细胞来源心肌细胞消化成单个心肌细胞,依据消化时间不同随机分为A、B、C、D、E组,各组消化时间依次为0.5、1、2、5及10 m in,每组分别记录5～6个来自不同培养皿的细胞自发动作电位.对自发动作电位的频率、静息电位、阈电位、振幅、最大去极化速率、复极时间、超极化电位和最大自动除极速率进行分析.结果 免疫荧光显示人诱导多能干细胞来源心肌细胞高表达心肌特异性标志物cT nT和α-actin;细胞消化前,肉眼下可见人诱导多能干细胞来源心肌细胞有自发跳动;各组细胞全细胞记录模式建立前的巨阻封接形成时间随着消化时间延长逐渐缩短[(4.80±1.10)m in、(2.10±0.55)m in、(2.20±0.84)min、(2.30±0.45)min、(0.75±0.27)min,P<0.01].各组间建立全细胞记录模式的细胞膜电容和串联电阻无差异.消化后膜片钳全细胞模式记录显示人诱导多能干细胞来源心肌细胞有自发动作电位,并有明显平台期,随着消化时间延长,平台期逐渐缩短[各组90％ 复极时间依次为:(0.77±0.02)s、(0.78±0.06)s、(0.65±0.03)s、(0.45±0.01)s、(0.35±0.03)s,P<0.01].结论 采用Accutase酶对人诱导多能干细胞来源心肌细胞进行分离有助于膜片钳记录.相比其他消化时间,Accutase酶消化1 min记录人诱导多能干细胞来源心肌细胞动作电位相对省时,同时可获得最佳动作电位形态.

心血管病学;人诱导多能干细胞来源心肌细胞;Accutase酶;细胞分离;消化时间;动作电位;膜片钳

邓玲玲;陈颖;宫艺其;付炜;王伟;郑吉建;张军;郑洁;杨礼

复旦大学附属肿瘤医院麻醉科 ,复旦大学上海医学院肿瘤学系 上海 200032;上海交通大学附属上海儿童医学中心 心胸外科 上海 200127;苏黎世大学分子心脏病学中心 苏黎世 8006;上海交通大学附属上海儿童医学中心 麻醉科 上海 200127

中国心脏起搏与心电生理杂志

[1]邓玲玲;陈颖;宫艺其;付炜;王伟;郑吉建;张军;郑洁;杨礼-.采用Accutase酶分离适合膜片钳记录的人诱导多能干细胞来源心肌细胞及其电生理学特性分析)[J].中国心脏起搏与心电生理杂志,2022(06):535-540

Accutase,人诱导多能干细胞来源心肌细胞

膜片钳,电生理学,体外分化,免疫细胞化学,化学检测,肌钙蛋白,cT,肌动蛋白,actin,动作电位,成单,消化时间,别记,培养皿,静息,去极化,超极化,极化电位,极速,免疫荧光,示人,nT,肉眼,眼下,跳动,全细胞记录,模式建立,封接,形成时间,细胞膜,膜电容,串联电阻,平台期,酶消化,位相,省时,获得最佳,心血管病学,细胞分离

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