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POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响
文献摘要：
目的 探究DNA聚合酶η(POLH)对过氧化氢(H2 O2)诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制.方法 以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H2 O2处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象,分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H2 O2最佳作用浓度用于后续实验,将培养的SRA01/04细胞分为H2 O2组、H2 O2+HA组和H2 O2+OV-POLH组,采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化,免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达.结果 RT-PCR结果显示,与透明晶状体前囊膜(1.00±0.22)相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降(0.38±0.62)(P<0.0001).RT-PCR和免疫印迹实验均显示,200μmol·L-1 H2O2处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低;TUNEL实验检测结果显示,200μmol·L-1 H2 O2处理后细胞的凋亡明显增加.RT-PCR和免疫印迹实验结果显示,与H2 O2组和H2 O2+HA组相比,H2 O2+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高(P<0.0001).免疫荧光染色结果显示,与H2 O2+HA组相比,H2 O2+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降.免疫印迹实验检测结果显示,与H2 O2组和H2 O2+HA组相比,H2 O2+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降,而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高(均为P<0.01);与H2O2组和H2O2+HA组相比,H2 O2+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降,而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高(均为P<0.01).结论 过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞凋亡,其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关.
文献关键词：
年龄相关性白内障;晶状体上皮细胞;氧化应激;DNA聚合酶η
中图分类号：
作者姓名：
李鹏飞;王从玉;王思文;鲍思洁;孙诚浩;管怀进
作者机构：
226001 江苏省南通市,南通大学附属医院眼科
文献出处：
引用格式：
[1]李鹏飞;王从玉;王思文;鲍思洁;孙诚浩;管怀进-.POLH对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的影响)[J].眼科新进展,2022(06):427-431
A类：
POLH,O2+HA,O2+OV,H2O2+HA
B类：
晶状体上皮细胞,防御机制,年龄相关性白内障,白内障患者,前囊膜,细胞系,SRA01,免疫印迹实验,最佳作用浓度,实验检测,免疫荧光法,氧化损伤标志物,TUNEL,BAX,BCL,Nrf2,Keap1,透明晶状体,相对表达量,免疫荧光染色,染色结果,H2A,促凋亡蛋白,转录调控,调控蛋白,过表达,损伤修复,修复功能,抑制氧化,ARE
AB值：
0.140639
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