典型文献
牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备
文献摘要：
本试验旨在制备牦牛早孕因子(early pregnancy factor,EPF)多克隆抗体,为牦牛妊娠早期高效快速诊断技术研究奠定基础.采用RT-PCR方法,从牦牛胎盘和卵巢组织中提取RNA,反转录为模板后进行EPF基因扩增,并将其克隆到改造后的载体pET28-His10-Sumo上,构建pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒,经PCR和测序鉴定后将阳性重组质粒转化至感受态大肠杆菌BL21(DE3)中.用IPTG诱导表达并优化表达条件,使用His标签镍柱纯化重组EPF蛋白并免疫小鼠制备抗体.结果 显示,经PCR扩增的牦牛EPF基因在300 bp左右,符合预期结果,并通过测序验证获得重组阳性质粒.pET28-His10-Sumo-EPF重组质粒转化后经IPTG的诱导,表达分子质量大小为29 ku的蛋白(其中包括早孕因子目标蛋白和SUMO标签蛋白),且在37℃、IPTG浓度为300 nmol· L-1、诱导6h时获得最高表达量.Western blot结果显示,蛋白在上清和包涵体中均有表达,免疫后的小鼠抗血清能够与纯化后的重组蛋白发生免疫反应.本试验通过原核表达系统成功表达了重组牦牛EPF蛋白,制备了免疫原性较好的鼠抗EPF多克隆抗体.
文献关键词：
牦牛;早孕因子(EPF);原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
曹艳桃;樊江峰;余四九;周应聪;杜培岩;李一娟;马进彪;赵生贤
作者机构：
甘肃农业大学动物医学院甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心,兰州730070
文献出处：
引用格式：
[1]曹艳桃;樊江峰;余四九;周应聪;杜培岩;李一娟;马进彪;赵生贤-.牦牛EPF的原核表达及多克隆抗体制备)[J].畜牧兽医学报,2022(02):470-480
A类：
His10
B类：
牦牛,EPF,原核表达,多克隆抗体制备,早孕,early,pregnancy,妊娠早期,高效快速,快速诊断,诊断技术,胎盘,卵巢组织,基因扩增,pET28,Sumo,重组质粒,感受态,大肠杆菌,BL21,DE3,IPTG,诱导表达,bp,预期结果,分子质量,ku,子目标,SUMO,标签蛋白,nmol,6h,blot,上清,包涵体,抗血清,重组蛋白,白发,免疫反应,表达系统,免疫原性
AB值：
0.300767
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