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山羊CREBZF蛋白两种亚型过表达载体的构建及其对子宫内膜上皮细胞凋亡的影响
文献摘要：
旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SM ILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响.本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝克隆技术将所获得各目的 基因片段与线性化pcDNA3.1(+)载体连接,构建pcDNA3.1(+)-SMILE和pcDNA3.1 (-+)-Zhangfei重组过表达载体,通过双酶切和测序进行鉴定;转染过表达载体至gEECs,提取总RNA和蛋白,通过qRT-PCR和Western blot验证过表达效率;应用流式细胞术检测过表达SMILE和Zhangfei对gEECs凋亡率的影响.PCR、双酶切显示各目的 条带大小正确;测序显示目的 片段与NCBI基因库中山羊CREBZF的预测序列一致性为100％;转染过表达载体后,gEECs中SMILE与Zhangfei在转录和翻译水平的表达量均显著增加,并发现SMILE可能在翻译后自身被修饰;空载体组细胞凋亡率为8.45％;转染pcDNA3.1 (+)-SMILE组凋亡率显著上升至12.41％(P＜0.01);转染pcDNA3.1 (+-)-Zhangfe组凋亡率上升至9.83％,但相较于空载体组统计学差异不显著;结果提示,CREBZF可能调控gEECs的凋亡进程.本研究将目的 基因分段克隆与无缝克隆技术联用,构建了上述2种过表达载体,为进一步探究C REBZF在反刍动物子宫内膜上皮细胞周期性变化中的作用奠定基础.
文献关键词：
CREBZF;过表达载体;无缝克隆;山羊子宫内膜上皮细胞;凋亡
中图分类号：
作者姓名：
牛宏宇;张瑞雪;齐茂振;马玉洁;曲栓;靳亚平;林鹏飞
作者机构：
西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100
文献出处：
引用格式：
[1]牛宏宇;张瑞雪;齐茂振;马玉洁;曲栓;靳亚平;林鹏飞-.山羊CREBZF蛋白两种亚型过表达载体的构建及其对子宫内膜上皮细胞凋亡的影响)[J].畜牧兽医学报,2022(01):132-140
A类：
CREBZF,Zhangfei,山羊子宫内膜上皮细胞,gEECs,Zhangfe,REBZF
B类：
过表达载体,对子,不同亚型,CDS,引物,分段进行,无缝克隆技术,线性化,pcDNA3,SMILE,组过,双酶,转染,qRT,blot,表达效率,流式细胞术,条带,带大,NCBI,基因库,预测序列,序列一致性,翻译水平,空载,细胞凋亡率,统计学差异,种过,反刍动物,细胞周期,周期性变化
AB值：
0.160737
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