典型文献
奶牛妊娠相关糖蛋白PAG6多克隆抗体的制备及鉴定
文献摘要：
基于抗原抗体反应检测奶牛(Bos taurus)血液中妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)是目前世界上应用最普遍的牛早孕检测技术,以boPAG6作为标志物应用于母牛早期妊娠诊断的准确性更高,因此制备高敏感性的boPAG6多克隆抗体,能为奶牛早期妊娠诊断试剂盒的研发提供支持.本研究利用PCR技术扩增荷斯坦奶牛boPAG6(GenBank No.NM_176617.2)基因,构建重组质粒pET30a-boPAG6;在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达His-boPAG6蛋白并优化,以重组蛋白His-boPAG6作为免疫原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)制备多克隆抗体,用ELISA方法检测血清效价,Western blot方法检测纯化后的抗体分别与重组蛋白His-boPAG6和奶牛血清的特异性反应,利用免疫荧光技术定位boPAG6在原代滋养层细胞中的表达.结果显示,本研究成功构建出大小为6534 bp的重组质粒pET30a-boPAG6,并在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)终浓度为0.5 mmol/L、诱导时间为8 h的条件下表达的His-boPAG6量最高,其蛋白分子质量为50 kD.以纯化后浓度为0.412 mg/mL的His-boPAG6蛋白免疫,ELISA中抗血清的效价为1:102400,多克隆抗体能特异性识别His-boPAG6抗原并有效区分妊娠和未妊娠奶牛血清,还可检测到原代滋养层细胞中存在boPAG6蛋白.本研究成功制备了boPAG6多克隆抗体,为奶牛早期妊娠ELISA检测系统的开发提供了理论支持.
文献关键词：
奶牛;妊娠相关糖蛋白6(PAG6);原核表达;多克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
李志明;袁梦仪;许海涛;蔡德霖;王相国;肖龙菲;安红;王颖秋;王骞;郭勇;齐晓龙;倪和民
作者机构：
北京农学院动物科学技术学院,北京102206;北京市昌平区动物疫病预防控制中心,北京102299;全国畜牧总站,北京100125
文献出处：
引用格式：
[1]李志明;袁梦仪;许海涛;蔡德霖;王相国;肖龙菲;安红;王颖秋;王骞;郭勇;齐晓龙;倪和民-.奶牛妊娠相关糖蛋白PAG6多克隆抗体的制备及鉴定)[J].农业生物技术学报,2022(08):1632-1639
A类：
PAG6,PAGs,boPAG6
B类：
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AB值：
0.290264
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