肌醇1,4,5-三磷酸受体2型(inositol 1,4,5-triphosphate receptor type 2,IP3R2)是位于内质网的细胞内Ca2+释放通道,通过调控Ca2+释放而影响蛋壳品质.为阐明IP3R2蛋白结构域对鸭(Anas platyrhyncha domestica)子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的调控效应及其对钙转运相关基因的影响,本研究以蛋鸭品种三穗鸭为研究对象,构建IP3R2蛋白结构域的表达载体pCDNA3.1-IP3R2,转染至鸭子宫内膜上皮细胞,以Flag标签ELISA检测试剂盒确定IP3R2蛋白结构域的表达量;以Fluo-3/AM钙离子荧光标记检测胞内Ca2+含量;以qPCR检测不同结构域过表达量及离子转运相关基因的mRNA水平.结果显示,MIR、RYDR_ITPR(1)、RYDR_ITPR(2)、RIH_assoc和Ion_trans结构域过表达均引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+浓度下降;RYDR_ITPR(1)和IP3R2-Ion_trans的表达量与胞内Ca2+浓度显著负相关(P<0.05);RYDR_ITPR(2)、RIH_assoc和5个结构域共转染的表达量与胞内Ca2+浓度极显著负相关(P<0.01);RYDR_ITPR(2)结构域表达量与RYR2、KCNJ15和CA2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);MIR结构域过表达量与IP3R1、CALB1和CA2的基因表达量呈现显著正相关(P<0.05),2个RYDR_ITPR结构域过表达量均与KCNJ15和RYR2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);RIH_assoc结构域过表达量与IP3R2和ORAI1基因表达量呈显著正相关(P<0.05);Ion_trans结构域过表达量与CALB1、SLC8A1和CA2基因表达量呈显著正相关(P<0.05);5个结构域共转染后的表达量与CFTR基因表达量呈显著正相关、与TRPV6呈显著负相关(P<0.05).上述结果提示,5个IP3R2蛋白结构域的过表达可能引起鸭子宫内膜上皮细胞内Ca2+向胞外释放,对细胞中20个离子转运基因表达水平的调控效应存在差异.本研究可为分子遗传标记选择和鸭蛋壳品质提高提供参考依据.

三穗鸭;肌醇1;4;5-三磷酸受体2型(IP3R2)蛋白结构域;子宫内膜上皮细胞;Ca2+分泌;蛋壳品质

杨酸;谭光辉;张依裕;游敏芳;廖朝美;谭元成;王盈童

贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,贵阳550025

农业生物技术学报

[1]杨酸;谭光辉;张依裕;游敏芳;廖朝美;谭元成;王盈童-.IP3R2结构域对三穗鸭子宫内膜上皮细胞Ca2+分泌的影响)[J].农业生物技术学报,2022(06):1153-1165

platyrhyncha,RYDR,ITPR,RIH,assoc

IP3R2,三穗鸭,鸭子,子宫内膜上皮细胞,Ca2+,肌醇,三磷,inositol,triphosphate,receptor,type,内质网,蛋壳品质,蛋白结构域,Anas,domestica,调控效应,钙转运,蛋鸭,鸭品种,表达载体,pCDNA3,Flag,检测试剂盒,Fluo,AM,钙离子,荧光标记,标记检测,qPCR,过表达,离子转运,MIR,Ion,trans,共转染,RYR2,KCNJ15,CA2,基因表达量,IP3R1,CALB1,ORAI1,SLC8A1,CFTR,TRPV6,转运基因,基因表达水平,分子遗传标记,鸭蛋壳

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